酶消化法分离培养原代肺动脉平滑肌细胞及免疫组化鉴定

发布时间：2017-12-01 16:19

  本文关键词：酶消化法分离培养原代肺动脉平滑肌细胞及免疫组化鉴定

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【摘要】：目的建立体外胶原酶消化法分离培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)及免疫鉴定的方法。方法采用I型胶原酶对PASMCs进行体外培养。在无菌环境下,分离提取雄性Sprague Dawley(SD)大鼠肺动脉主干,剥离外膜、剔除内皮细胞,经酶消化法,体外培养PASMCs。倒置相差显微镜观察PASMCs生长状态及特点;台盼兰测定细胞活力;免疫细胞染色法进行平滑肌α-肌动蛋白(α-SM actin)鉴定。结果酶消化法分离培养的PASMCs 3 d后,可见细胞贴壁呈梭形生长,6 d后生长迅速呈典型的峰-谷状生长,9 d后达90%融合。通过形态学观察及免疫荧光染色法鉴定表明:培养的细胞为PASMCs;细胞存活率为98.5%;原代培养8~10 d后即可传代,3-10代细胞生长迅速、细胞形态不易发生改变,可用于进行细胞实验。结论采用I型胶原酶消化法简单易行、可靠、PASMCs生长迅速、传代周期短的特点;尤为重要的是,培养的原代PASMCs可用于肺动脉高压和肺血管重构的研究工作。
【作者单位】： 南华大学医学院应用解剖研究所;南华大学附属第一医院病理科;
【基金】：湖南省教育厅科研项目(13C837) 湖南省科技厅项目(2014FJ3016)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)是以肺血管阻力的增加和肺动脉压力持续增高为特征的进展性疾病,肺血管重构作为PAH的重要病理特征,对其机理进行深入研究有助于进一步阐述PAH的发生、发展机制[1-3]。研究表明,肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth musc

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 侯乐伟;廖明芳;翁剑锋;杨琳;邹思力;景在平;;α-平滑肌肌动蛋白在人胸主动脉夹层中的表达[J];现代生物医学进展;2010年01期

2 辛毅;龚达;习昕;石洪涛;刘飒;许秀芳;李娜;黄益民;;酶联合消化法和贴块法分离小鼠肺动脉平滑肌细胞及其生物学特性的研究[J];中国生物工程杂志;2013年09期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 辛毅;龚达;习昕;石洪涛;刘飒;许秀芳;李娜;黄益民;;酶联合消化法和贴块法分离小鼠肺动脉平滑肌细胞及其生物学特性的研究[J];中国生物工程杂志;2013年09期

2 廖运学;王昌明;蒋明;马礼兵;徐青;陈峰;吕倩;;大鼠远端肺动脉平滑肌细胞原代培养及其生物学特性和功能的研究[J];中国全科医学;2014年27期

3 辛毅;刘飒;许秀芳;李温斌;黄益民;罗毅;周玉杰;;成年小鼠心成纤维细胞的原代培养及生物学特性[J];细胞与分子免疫学杂志;2012年11期

4 彭文;周湘鸿;柴湘平;周胜华;;主动脉夹层生物学诊断指标的研究进展[J];医学综述;2013年02期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 李斌;NOTCH-1在主动脉瓣二叶畸形合并升主动脉扩张发生中的作用机制研究[D];第二军医大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 章_┝，

本文编号：1241702