人ATG4B的表达及蛋白纯化和鉴定

发布时间：2017-12-02 02:10

  本文关键词：人ATG4B的表达及蛋白纯化和鉴定

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【摘要】：目的构建含His标签的自噬相关蛋白4同源物B(ATG4B)重组质粒以得到His-ATG4B蛋白,初步鉴定其生物学活性。方法利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出ATG4B基因的编码序列,插入p ET-28a(+)载体中得到重组质粒,经酶切鉴定后转化Rossate菌,挑选小量诱导出的His-ATG4B菌液进行His-ATG4B蛋白的纯化,SDS-PAGE和Western blot法检测His-ATG4B蛋白的纯化效果,GST pull-down技术对蛋白生物学功能进行鉴定。结果用PCR技术从人乳腺文库中扩增得到大小约1100 bp的目的片段,插入p ET-28a(+)载体中构建出His-ATG4B重组质粒,酶切鉴定及测序结果均表明His-ATG4B质粒构建成功;转化Rossate菌并小量诱导,表达鉴定成功后纯化蛋白,得到相对分子质量(Mr)约为47 000的His-ATG4B蛋白,且SDS-PAGE检测蛋白纯化效果较好;GST pull-down实验证实His-ATG4B蛋白可以和LC3B蛋白在体外相互作用,生物学活性良好。结论本实验成功得到His-ATG4B蛋白,为研究ATG4B在自噬中的作用机制奠定实验基础。
【作者单位】： 军事医学科学院生物工程研究所;解放军总医院第一附属医院;总参警卫局卫生保健处;
【基金】：国家自然科学基金(31100604) 院创新基金(ZHYX003)
【分类号】：R3411
【正文快照】： 自噬相关蛋白4同源物B(autophagy-relatedprotein 4 homolog B,ATG4)是一种半胱氨酸蛋白酶,在细胞发生自噬的过程中,通过剪切和去脂作用调节ATG8蛋白的脂化修饰[1]。研究发现,在酵母细胞中至少有19种自噬相关基因(autophagy-related gene,ATG)参与了自噬小体的形成[2],其中ATG

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 范忠义;徐小洁;曹佳;康磊;韩白玉;蒋凯;叶棋浓;杜楠;;人GST-Cdc25C融合蛋白的原核表达、纯化及功能初步检测[J];细胞与分子免疫学杂志;2012年03期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 赵金匣;王志平;陶燕;贺振华;郭琦;洪梅;;携带FLAG标签的人BTG2真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达[J];吉林大学学报(医学版);2014年06期

2 朱红裕;李强;;外源蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达策略[J];过程工程学报;2006年01期

3 古亚楠;赵永亮;王丹;陈静;;转基因植物研究中目标蛋白鉴定方法研究进展[J];河南师范大学学报(自然科学版);2010年06期

4 徐明;严晓文;杨利民;王秋泉;;化学标记与蛋白质/多肽的识别检测[J];中国科学:化学;2011年04期

5 张平平;张剑韵;黄龙全;;家蚕吡哆醛激酶的融合表达与纯化[J];昆虫学报;2010年09期

6 王娅宁;李淑娟;;融合标签技术及其应用[J];科技经济市场;2009年06期

7 邹少林;丁先锋;郭江峰;;重组FLAG标签的融合表达纯化及亲和常数的测定[J];科技通报;2010年03期

8 黄茜;黄璐;潘道东;杨瑶;;植物乳杆菌Lactobacillu plantarumY1菌株胆盐水解酶基因(bsh)的克隆及重组表达[J];南京师大学报(自然科学版);2010年03期

9 聂春明;宁晓彦;张宇宏;樊晓虎;赵国芬;张伟;;应用融合标签技术提高乳糖酶在毕赤酵母中的分泌表达[J];中国农业科技导报;2012年05期

10 黄豫晓;刘学武;沈燕;李英辉;梁娇;王军;刘忠湘;赵亚;徐志凯;;PbTIP多克隆抗体对恶性疟原虫生长抑制作用的初步研究[J];科学技术与工程;2013年03期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 孙铭飞;覃宗华;谢明权;吕敏娜;于劲术;吴彩艳;蔡建平;;柔嫩艾美尔球虫Ⅱ型丙二酰单酰辅酶A：ACP转移酶(EtMAT)不同表达载体的构建及其优化表达策略[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 徐立新;MeJA对人参DS基因表达的影响及DS在酵母中的表达[D];吉林大学;2011年

2 吕大伟;抗RANKL单克隆抗体在大鼠类风湿性关节炎模型中的应用及RANKL转录调控的探索性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年

3 杨柳青;蛇根木阿吗灵生物合成途径中三个重要酶的表达，纯化，结晶，，三维结构表征及催化机理研究[D];浙江大学;2011年

4 李嘉尧;红螯光壳螯虾亲虾脂类营养需求及脂肪酸结合蛋白的功能研究[D];华东师范大学;2011年

5 赵健;AGR2基因促肝癌转移的研究和HDGF相互作用蛋白的鉴定[D];复旦大学;2011年

6 卢艳;日本血吸虫诊断抗原的筛选、鉴定及初步评价[D];华东理工大学;2012年

7 李雅楠;芽孢杆菌β-甘露聚糖酶新基因的快速筛选、克隆及表达研究[D];中国农业科学院;2006年

8 张君;乙型肝炎病毒包膜蛋白受体的分离及其识别位点的鉴定[D];重庆医科大学;2007年

9 柯涛;α-淀粉酶的分子定向进化及其突变体结构与功能研究[D];华中科技大学;2006年

10 梁晶丹;变铅青链霉菌DNA磷硫酰化修饰特征及机理的研究[D];上海交通大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 亓振国;分子伴侣表达载体构建及TEV蛋白酶突变体的功能分析[D];安徽农业大学;2010年

2 耿计伟;乳腺癌特异性转导多肽介导的HSV-tk/GCV抗瘤系统的构建及其体外靶向效应研究[D];昆明医学院;2011年

3 张s

本文编号：1243262