自噬在慢性砷诱导的人支气管上皮细胞转化中的作用

发布时间：2017-12-02 18:29

  本文关键词：自噬在慢性砷诱导的人支气管上皮细胞转化中的作用

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【摘要】：目的： 长期暴露于砷污染中时可以诱导多种肿瘤的发生。皮间质转化（Epithelial-mesenchymal Transition）是肿瘤发生的一个重要步骤，自噬是细胞用来对抗自身转化的自我保护机制，本文旨在探讨人支气管上皮细胞BEAS-2B经慢性亚砷酸钠诱导后，自噬在BEAS-2B转化中的作用。 方法： 1. BEAS-2B细胞处理 用2.5ummol/L亚砷酸钠诱导48h为急性砷诱导；用0.25ummol/L亚砷酸钠诱导66天为慢性砷诱导；对照组BEAS-2B相同条件无亚砷酸钠培养66天；Beclin-1shRNA质粒转染BEAS-2B细胞抑制自噬；10nM雷帕霉素作用BEAS-2B细胞24h增强自噬；10nM巴弗洛霉素A1作用BEAS-2B细胞24h抑制自噬。 2.集落形成实验 经0.25uM亚砷酸钠暴露培养66天的BEAS-2B细胞，进行软琼脂集落形成实验，14天后显微镜下观察克隆形成情况，挑取细胞克隆消化培养为转化细胞。 3.自噬检测 Western Blot检测各组自噬标志蛋白Beclin-1，LC3Ⅱ，P62，观察自噬的活性；细胞经单丹磺酰戊二胺染色（MDC）染色,荧光显微镜观察自噬小体绿色荧光信号。 4.上皮间质转化（EMT）标志物和炎性体相关蛋白检测 调节自噬，Western Blot检测上皮细胞标志蛋白E-cadherin、间质细胞标志蛋白Vimentin、凋亡相关斑点样蛋白ASC表达。 结果： 1. BEAS-2B细胞经慢性亚砷酸钠暴露66天，，克隆形成率为22.77%，较对照组（3.06%）具有显著差异（p0.01）； 2.慢性砷诱导转化的BEAS-2B细胞，形态由上皮细胞的不规则多边形变为梭形；成功建立各组细胞，获得pDNA-Beclin1shRNA质粒稳定转染的细胞。 3.急性砷诱导组beclin-1蛋白、LC3Ⅱ蛋白的表达最高，慢性砷诱导组beclin-1蛋白、LC3Ⅱ蛋白的表达较前者下降，但仍然高于对照组；而这两组细胞自噬降解蛋白P62的表达低于对照组。 4.与对照组相比，急性砷诱导组和慢性砷诱导组MDC染色显示较强的绿色荧光信号，其中急性砷诱导组荧光信号最强。 5.以雷帕霉素促进自噬，上皮标志蛋白E-cadherin表达增多，而间质标志蛋白vimentin表达下降；而以巴弗洛霉素A1抑制自噬后，结果正相反。 6. IL-1β成熟体与凋亡相关斑点样蛋白ASC的表达随着雷帕霉素促进自噬而下降，随着巴弗洛霉素A1抑制自噬而升高。 结论： 1.慢性亚砷酸钠诱导的BEAS-2B细胞形态发生改变，克隆形成能力增强，细胞发生转化； 2.亚砷酸钠诱导人肺支气管上皮细胞促进自噬， 3.自噬对ASC与IL-1β具有负调节作用，自噬对细胞转化进程起负调节作用；
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392

【参考文献】

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1 余思;何晓顺;马毅;胡安斌;巫林伟;朱晓峰;;雷帕霉素转换在肝移植术后肾功能不全患者中的应用[J];南方医科大学学报;2009年11期

2 张可华;宋建国;;EMT与肿瘤[J];生命的化学;2008年05期

本文编号：1245900