p53修饰的肿瘤抗原致敏制备DC瘤苗及其抗肿瘤效应

发布时间：2017-12-07 22:05

  本文关键词：p53修饰的肿瘤抗原致敏制备DC瘤苗及其抗肿瘤效应

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【摘要】：目的： 观察p53基因修饰、制备的树突状细胞（DC）瘤苗在体内外的特异性杀瘤效应，探讨通过基因修饰肿瘤抗原来提高DC瘤苗的抗肿瘤免疫效应的可能。 方法： 1、野生型p53质粒转染黑色素瘤B16细胞，Real-time PCR和Western blot检测p53转染前、后的表达；冻融法提取p53修饰的肿瘤抗原（p53-Ag），体外冲击同基因Km小鼠骨髓来源的树突状细胞，制得DC瘤苗。 2、MTT法检测DC瘤苗对淋巴细胞的刺激增值效应（MLR）及细胞毒性T淋巴细胞（CTL）体外杀瘤效应。实验均设单纯DC、B16-DC和p53-DC三组，MLR以DC为刺激细胞，脾淋巴细胞为效应细胞，CTL以致敏T细胞为效应细胞，B16为靶细胞，作常规细胞培养和观察。 3、背部皮下接种B16细胞复制实体瘤模型，荷瘤小鼠随机分成B16组、DC组、B16-DC组和p53-DC组，另设一正常对照组。分别于接种后的第1、7、14d，分3次在瘤周注射DC瘤苗，每3天测量一次肿瘤最大垂直长、短径，计算瘤体球积和各组平均体积，描绘肿瘤生长曲线；第21d处死小鼠，取肿瘤组织和血液标本，称瘤重后计算各组平均瘤重，ELISA法检测血清IL-12和IFN-γ含量变化。 结果： 1、p53质粒转染后的肿瘤细胞均有p53基因及产物的表达，用该p53修饰的肿瘤抗原冲击、制得的DC瘤苗完全符合成熟DC的形态特征； 2、DC瘤苗的体外效应MLR：当刺激/效应细胞比值为1：40时，三组刺激指数各为1.49、2.49和2.93，B16-DC组、p53-DC组明显高于DC组（P均＜0.05），p53-DC组也显著高于B16-DC组（P＜0.05）；而比值为1：80时，，三组刺激指数虽有降低，但三组间差异的两两比较结果与1：40时相同（P均＜0.05）。CTL：以效/靶比为1：20时的杀伤率最高，三组各为30.00%、37.89%和52.47%，p53-DC组和B16-DC组均显著高于DC组（P＜0.01），p53-DC组也显著高于B16-DC组（P＜0.01）；而效/靶比为1：40时，三组杀伤率（24.24%、35.92%和46.63%）略有降低，但三组间两两比较，差异均十分显著（P均＜0.01）。 3、DC瘤苗的体内抑瘤效应接种后的肿瘤生长曲线显示，B16组小鼠成瘤最早，生长最快；DC组成瘤晚，生长缓慢；B16-DC组和p53-DC组则成瘤最晚，生长最慢，9天后瘤体仅米粒大，且大部分瘤体呈消退趋势。21天时，B16组平均瘤重为0.453g，DC组为0.025g，而B16-DC组和p53-DC组几乎取不到肿瘤组织，差异十分显著（P＜0.01）。病理学观察发现，DC瘤苗治疗组的肿瘤组织内血管生成较少，有较多的淋巴细胞浸润，细胞变性与坏死较多见。 4、ELISA检测外周血细胞因子IL-12：各实验组血清IL-12含量均较B16组显著升高（P＜0.01），其中B16-DC组和p53-DC组明显高于DC组（P＜0.01），p53-DC组又显著高于B16-DC组（P＜0.01）。IFN-γ：除DC组外，各实验组血清IFN-γ含量都较B16组显著升高（P均＜0.01），B16-DC组和p53-DC组均显著高于DC组（P均＜0.01），p53-DC组又明显高于B16-DC组（P＜0.05）。p53-DC组的IL-12和IFN-γ含量均最高。 结论： 1、p53基因修饰确能增强肿瘤抗原诱导特异性免疫应答的能力，其修饰的DC瘤苗对淋巴细胞的增殖刺激能力较未经修饰的DC更强； 2、在体外，p53修饰的DC瘤苗能明显激发抗肿瘤免疫应答，提高T淋巴细胞对肿瘤细胞的特异性杀伤作用。 3、在体内，p53修饰的DC瘤苗能显著地抑制移植性肿瘤的生长，并明显提高荷瘤动物外周血IL-12和IFN-γ的水平。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392

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本文编号：1263951