利用CRISPR-Cas9系统建立Prmt1敲除的小鼠胚胎干细胞系

发布时间：2017-12-11 17:14

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【摘要】：目的利用CRISPR-Cas9系统构建Prmt1敲除的E14小鼠胚胎干细胞系,并分析验证其敲除效果。方法利用第3代基因编辑技术CRISPR-Cas9系统,针对Prmt1第4、5、6、7外显子设计4条gRNAs,gRNA两两组合转染E14细胞,特异性的敲除E14细胞中的Prmt1,并在蛋白质水平,mRNA水平和基因组水平分别验证敲除效果。结果与对照组相比,两组敲除实验组都检测不到Prmt1蛋白质和mRNA的表达,基因组测序结果分析显示,两实验组中Prmt1的mRNA均出现无义突变,使其mRNA的翻译异常终止。同时,实时定量PCR结果显示,精氨酸甲基转移酶家族其他成员Prmt2,Carm1和Prmt6 mRNA表达不受影响。结论成功获得特异性敲除Prmt1的E14细胞系,为研究Prmt1在胚胎干细胞中的作用提供了重要工具。
【作者单位】： 中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(90919048) 国家教育部博士点基金资助项目(20111106110024)
【分类号】：R321
【正文快照】： 基因编辑技术,是指对DNA的核苷酸进行插入、置换和删除等操作,从而特异性的去改写DNA图谱的技术。基因编辑技术是基因功能研究的重要手段,也是遗传学和分子生物学的重要研究方向。Zinc-Finger Nucleases(ZFNs)和Transcription Activator-Like Effector Nucleases(TALENs)是基

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