CRISPR-Cas9敲减猪GGTA1基因的质粒构建

发布时间：2017-12-16 07:00

  本文关键词：CRISPR-Cas9敲减猪GGTA1基因的质粒构建

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【摘要】：目的:利用CRISPR-Cas9基因编辑技术,构建靶向猪GGTA1基因的敲减质粒。方法:将Lenti CRISPR-v2质粒转化感受态DH5α进行扩增并提取该质粒,设计并合成靶向猪GGTA1基因的g RNA(guide RNA,g RNA)序列,对Lenti CRISPR-v2质粒进行Bsm BI酶切及电泳和胶回收,并将胶回收产物与g RNA序列进行连接,构建Lenti CRISPR-v2-g RNA重组质粒,将该重组子转化感受态DH5α,培养过夜后,将其涂布于含有氨苄青霉素(Ampicillin,AMP)的LB固体培养基,筛选阳性单克隆DH5α进行培养并提取质粒,对提取的Lenti CRISPR-v2-g RNA敲减质粒进行Kpn I与Eco RI双酶切验证与序列测定。结果:Lenti CRISPR-v2载体酶切结果正确;目的 g RNA序列成功插入酶切后的Lenti CRISPR-v2载体且序列正确。结论:利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功构建靶向猪GGTA1基因的敲减质粒,该研究为后续慢病毒的包装及CRISPR-Cas9系统敲减猪GGTA1基因的效率与功能研究奠定了基础。
【作者单位】： 深圳市第二人民医院;深圳大学第一附属医院深圳市驯化器官医学工程技术研究开发中心;
【基金】：国家自然科学基金(81200465) 深圳市“三名”工程(驯化器官)项目(2015)
【分类号】：R3416
【正文快照】： 异种移植是当前解决人类供体器官不足的有效途径,其中猪→人的异种器官移植是可能的解决途径之一,但此方法与同种移植相比,需解决由更强烈更复杂的免疫排斥反应所产生的问题[1]。其中反应较强烈的超急性排斥(hyperacuterejection,HAR)是异种移植研究中首要解决的问题[2,3]。GG

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

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中国硕士学位论文全文数据库 前1条

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【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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中国博士学位论文全文数据库 前8条

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【二级参考文献】

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8 李幼平,马玉奎,何秋明;临床异种大动物器官移植的现状、问题与对策综述[J];中国修复重建外科杂志;1998年02期

9 李幼平,何秋明,蔡绍晖,程惊秋;异种移植与中国地方猪种资源的利用[J];中国修复重建外科杂志;1999年01期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 常宏宇;宫锋;季守平;鲍国强;李素波;章扬培;李芳;聂亚玲;;利用正负筛选打靶载体在猪肾细胞系PK-15细胞中敲除GGTA1基因[J];军事医学科学院院刊;2010年03期

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本文编号：1295085