肿瘤相关抗原胰岛素样生长因子2mRNA结合蛋白3多克隆抗体的制备和鉴定

发布时间：2017-12-18 14:11

  本文关键词：肿瘤相关抗原胰岛素样生长因子2mRNA结合蛋白3多克隆抗体的制备和鉴定

  更多相关文章： 胰岛素样生长因子 mRNA结合蛋白 原核表达 多克隆抗体 肿瘤相关抗原

【摘要】：目的构建胰岛素样生长因子2mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化IGF2BP3-His融合蛋白,制备和鉴定小鼠抗人IGF2BP3多克隆抗体。方法用PCR方法扩增IGF2BP3基因,构建到pET-28a原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导IGF2BP3蛋白的表达。所获得的蛋白经镍柱亲和层析纯化,并用透析方法脱去尿素使蛋白复性,获得IGF2BP3原核表达蛋白。将制备的原核表达蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,再用ELISA、Western blot法、免疫组织化学法对抗体的反应性及特异性进行鉴定。结果成功克隆出IGF2BP3基因,经测序与GenBank公布的序列一致;PCR酶切鉴定证实成功构建了pET-28a-IGF2BP3原核表达载体;质粒在BL21(DE3)中成功表达出相对分子质量(Mr)为70000左右的融合蛋白,纯化后经SDS-PAGE分析纯度在90%以上。ELISA确定抗体效价在1∶50000以上,且Western blot法和免疫组织化学技术均证实多克隆抗体能特异性识别目的蛋白。结论成功制备了特异性的小鼠抗人IGF2BP3的多克隆抗体。
【作者单位】： 中日友好医院检验科;梅奥医学中心生物化学与分子生物学系;北京大学医学部基础医学院免疫学系T细胞实验室;解放军第302医院肝衰竭诊疗与研究中心;解放军第306医院心胸外科;
【基金】：国家自然科学基金青年基金(81301495) 中日友好医院青年英才计划(2014-QNYC-B-12) 国家科技支撑计划课题(2012BAH24F05)
【分类号】：R392
【正文快照】： 胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(insulin likegrowth factor 2 mRNA-binding protein 3,IGF2BP3),定位于染色体7p11.5。开放读框(open reading frame,ORF)全长1740 bp,编码579氨基酸。其编码的蛋白含有4个K同源结构域(K homologous domain,KH结构域)和2个RNA识别基序(RNA re

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 吕丹;钱晓萍;田晓军;张毓;张君;;人UNC5CL原核蛋白的表达及多克隆抗体的制备和鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2010年03期

2 林黎娟;张锦辉;王研;郑琳琳;林贞花;蔡英兰;;胰岛素样生长因子2mRNA结合蛋白3在肺鳞癌的表达及预后分析[J];细胞与分子免疫学杂志;2013年07期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 黄新立;高园园;丁军;王学浩;;原发性肝细胞肝癌组织中IMP3表达与临床特点和基因甲基化相关性的研究[J];南京医科大学学报(自然科学版);2014年05期

2 胡帅;俞悦;高云;吕凌;李国强;;IMP3与IGF2在乙肝相关性肝癌组织中表达及与临床病理特征的关系[J];南京医科大学学报(自然科学版);2014年05期

3 聂佳;章丽霞;刘钧;;胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白—3(IMP3)在妇科肿瘤中的应用[J];川北医学院学报;2014年06期

4 张冉;王全义;张军臣;于珊珊;王海涛;敖启林;;IMP3蛋白及Ki-67在脑胶质瘤中的表达及临床意义[J];济宁医学院学报;2015年01期

5 吴倩;李群;;子宫内膜透明细胞癌的诊治进展[J];实用医学杂志;2014年08期

6 宋慧娟;李宏丹;魏嘉;苏荣健;;人GRP78蛋白的原核表达、纯化及抗原活性鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年10期

7 高园园;张峰;;IMP3在原发性消化系统肿瘤中的作用[J];医学综述;2013年17期

8 杨拥军;张秀琳;谭庆民;;IMP3在子宫内膜癌中的表达及意义[J];中国实用医药;2014年03期

9 刘纪昀;易韦;于燕妮;张著学;吴倩;文安智;;IMP3、P16在宫颈上皮内瘤变及浸润性癌中的表达及意义[J];中国妇幼保健;2014年11期

10 吴倩;易韦;张著学;刘纪昀;文安智;林永顺;;IMP3及P16在宫颈癌筛查脱落细胞块中的表达和意义[J];中国妇幼保健;2014年26期

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 顾伟亭;CDK8和SREBP1在子宫内膜癌发生发展中的作用及其机制研究[D];山东大学;2013年

2 孙向洁;IMP3在肺腺癌中的表达与临床预后的相关性研究及初步机制探讨[D];复旦大学;2013年

3 王湛博;ERG在肝脏原发梭形细胞恶性肿瘤中的表达及意义[D];中国人民解放军医学院;2014年

4 苏鹏;IMP3在乳腺癌上皮间叶转化及多药耐药中的研究[D];山东大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前9条

1 刘卓雅;CRMP-2和IMP-3在肺癌中的表达及意义[D];华中科技大学;2013年

2 吴倩;子宫内膜透明细胞癌的诊治进展[D];蚌埠医学院;2014年

3 李文君;IMP3、RFP、HER-2蛋白在Ⅱ型子宫内膜癌中的表达及意义[D];河北医科大学;2014年

4 许希中;IMP3，，HIF-1α和TWIST在子宫内膜癌中的表达及其临床病理学意义[D];苏州大学;2013年

5 Sujita Shrestha;P16、P53和IMP3在宫颈癌前病变和宫颈癌中的表达和意义[D];天津医科大学;2014年

6 刘俊锋;IMP3与CD44v6在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义[D];郑州大学;2014年

7 李冰熠;IMP1在上皮性卵巢癌组织中的表达及其意义[D];郑州大学;2014年

8 邓知之;IMP3、IGF-Ⅱ在宫颈癌中的表达及意义[D];中南大学;2014年

9 胡帅;IMP3联合CD44s预测肝癌肝切除患者预后的实验研究[D];南京医科大学;2014年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 林黎娟;金政;林贞花;王研;蔡英兰;;肝细胞癌组织中IMP3蛋白的表达及意义[J];临床与实验病理学杂志;2012年01期

2 李康华;黄跃平;张俊;李国军;李思鸿;;IMP3蛋白在骨肉瘤组织中的表达与临床意义[J];细胞与分子免疫学杂志;2009年05期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 唐洁;孙平;章晓联;;人CD59基因克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备[J];细胞与分子免疫学杂志;2009年10期

2 吴玉;蔡媛媛;徐霞;林云恩;;人Ⅱ型高尔基体膜蛋白73多克隆抗体的制备及免疫学鉴定[J];广东医学;2013年02期

3 张娜;钱琨;朱明月;高爱俊;邵红霞;金文杰;秦爱建;;鸡源性高迁移率族蛋白B1多克隆抗体的制备及应用[J];细胞与分子免疫学杂志;2014年03期

4 靳晓红;卢圣新;刘元东;郗日末;苏静静;;食品中残留抗生素多克隆抗体的制备[J];中国预防医学杂志;2007年02期

5 苏莉;刁振宇;胡娅莉;张艳青;王志群;;富含半胱氨酸蛋白61多克隆抗体的制备及其在子痫前期胎盘检测中的作用[J];现代生物医学进展;2009年10期

6 安薇;徐霞;;人脂联素球状结构域基因的原核表达及多克隆抗体的制备[J];中国免疫学杂志;2011年09期

7 秦伟;毛朝明;王胜军;吴蔚;牟笑;许化溪;包丹霞;;人UL16结合蛋白3的原核表达及其多克隆抗体制备[J];细胞与分子免疫学杂志;2012年05期

8 王春苗;贾天军;;豚鼠衣原体GPIC0474多克隆抗体制备[J];河北北方学院学报(自然科学版);2012年03期

9 贺贞;林东子;李观强;马卫列;丁航;张志珍;;H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定[J];第三军医大学学报;2012年16期

10 薛一;孙静;刘梦兰;黄琼;杜新丽;张日华;刘云;;S100A16基因的原核表达和多克隆抗体制备[J];南京医科大学学报(自然科学版);2012年10期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 孟庆玲;才学鹏;乔军;景志忠;张艳;田广孚;郭爱疆;;中国白兔白介素-10基因的克隆、表达及其多克隆抗体的制备[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年

2 俞娟;伍欣星;;重组BLCAP多克隆抗体的制备及初步应用[A];湖北省暨武汉市生物化学与分子生物学学会第八届第十七次学术年会论文汇编[C];2007年

3 高t熻

本文编号：1304449