家蝇抗真菌肽MAF-1原核表达条件优化及活性验证

发布时间：2017-12-19 14:02

  本文关键词：家蝇抗真菌肽MAF-1原核表达条件优化及活性验证　出处：《中国公共卫生》2015年11期 　论文类型：期刊论文

  更多相关文章： 家蝇抗真菌肽(MAF-) 重组融合蛋白 表达条件 纯化

【摘要】：目的优化家蝇抗真菌肽(MAF-1)原核表达条件及重组蛋白的活性验证。方法利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Quantity One凝胶电泳图像分析系统研究不同的诱导温度、异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导浓度和诱导时间对融合蛋白表达的影响;融合蛋白用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行蛋白纯化,切除His标签后进行活性验证。结果在加入浓度为25μmol/L的IPTG,34℃诱导18 h,融合蛋白的表达量最高;融合蛋白纯化后浓度为0.706 mg/m L,其最低抑杀白色念珠菌的浓度为70μg/m L。结论成功获得重组融合蛋白的最佳表达条件,并纯化目的蛋白,切除His标签后的目的蛋白具有抗真菌活性。
【作者单位】： 贵阳医学院寄生虫学教研室;皖北煤电集团总医院;贵州省疾病预防控制中心;
【基金】：国家科技支撑计划(2011BAC06B12) 国家自然科学基金(81360254) 贵州省科学技术基金(黔科合J字[2012]2038号)
【分类号】：R3411
【正文快照】： 抗菌肽(antimicrobial peptides,AMP)是生物免疫系统产生的一类抵抗外界病原体感染的小分子多肽[1-3],具有抗菌、抗病毒、抗寄生虫、抑制肿瘤细胞及免疫调节活性[4-7]。其作用机制独特、理化性质稳定,仅作用于病原微生物,对人正常细胞无副作用[8-9]。AMP这种选择性特点在抗病

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 ;Efficient expression of codon-adapted human acetaldehyde dehydrogenase 2 cDNA with 6×His tag in Pichia pastoris[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2009年10期

2 阎岩;吴建伟;罗杰;洪牧;国果;付萍;;家蝇滞育幼虫血淋巴中抗病毒肽甲醇萃取方法的优化[J];昆虫学报;2009年06期

3 戴鹏;戴佳琳;黄江;廖兴江;郎书源;周灵贵;申萍香;;亚洲牛带绦虫TaCRISP基因克隆、表达和序列分析[J];中国公共卫生;2009年04期

4 单晓枫;吴同垒;王贵生;钱爱东;;水产动物抗菌肽基因异源表达研究进展[J];中国兽药杂志;2011年11期

5 刘晖;王鑫;蔡辉霞;曹建平;沈玉娟;;抗菌肽attacin重组杆状病毒表达载体构建[J];中国公共卫生;2013年12期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 孙莉;李智博;秦飞;邓帅;杨君;;人乙醛脱氢酶2的原核表达及其条件优化[J];基因组学与应用生物学;2012年02期

2 张卓娜;陶妍;;斑点叉尾洶NK-lysin基因的cDNA克隆及融合表达质粒构建[J];生物技术通报;2012年09期

3 周灵贵;戴佳琳;黄江;廖兴江;胡旭初;余新炳;申萍香;郎书源;;亚洲带绦虫包虫诊断抗原P-29基因克隆表达[J];中国公共卫生;2009年09期

4 戴佳琳;黄江;廖兴江;周灵贵;申萍香;刘玉江;郎书源;;猪带绦虫腺苷酸激酶基因及蛋白结构特性分析[J];中国公共卫生;2009年10期

5 戴佳琳;廖兴江;胡旭初;徐劲;余新炳;吴璇;黄江;;亚洲牛带绦虫自吞噬相关蛋白3基因克隆及表达[J];中国公共卫生;2009年12期

6 戴佳琳;黄江;李波;廖兴江;王宇;;牛带绦虫乳酸脱氢酶基因原核表达及免疫学特征[J];中国公共卫生;2010年08期

7 戴佳琳;黄江;廖兴江;李波;王宇;江楠;;亚洲带绦虫EIFs3克隆与免疫反应性分析[J];中国公共卫生;2010年09期

8 骆强;戴佳琳;黄江;廖兴江;;牛带绦虫成虫钙调神经磷酸酶B基因生物信息学分析[J];中国公共卫生;2010年09期

9 刘玉江;戴佳琳;黄江;王宇;;牛带绦虫ATE基因功能预测及原核表达[J];中国公共卫生;2011年01期

10 刘玉江;戴佳琳;黄江;王宇;;猪带绦虫成虫EF-1基因生物信息分析及原核表达[J];中国公共卫生;2011年01期

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 单晓枫;乌鳢感染A.veronii差异基因的筛选及代表性基因在体内表达规律研究[D];吉林农业大学;2013年

2 王珊珊;基于结构的近平滑假丝酵母（R）-专一性醇脱氢酶催化机理解析与性能调控[D];江南大学;2014年

3 鲁维飞;猪Rspo3基因的原核及真核表达研究[D];河南农业大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 许伊民;从头设计α-螺旋抗菌肽以提高其抗菌特异性的研究[D];吉林大学;2010年

2 冯其;α-螺旋抗菌肽与传统抗生素的体内和体外的协同抗菌作用研究[D];吉林大学;2014年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李伟;陈松林;;大菱鲆抗菌肽基因酵母表达载体的构建及表达[J];长江大学学报(自然科学版)农学卷;2008年04期

2 朱江,吴祥甫;昆虫杆状病毒表达系统研究进展及其应用展望[J];蚕业科学;2003年02期

3 李胜杰;白俊杰;刘碧莲;叶星;于凌云;全迎春;;大口黑鲈hepcidin真核表达载体构建及表达的初步研究[J];淡水渔业;2009年02期

4 武梅;范美华;廖智;石戈;王日昕;;厚壳贻贝抗菌肽mytilin和myticin真核表达载体构建及表达的初步分析(摘要)(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2010年07期

5 申望;叶茂;石戈;王日昕;;三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)Ⅰ型Crustin抗菌肽的基因克隆与真核重组表达[J];海洋与湖沼;2010年03期

6 高松;吴建伟;付萍;张阿梅;董熙昌;;家蝇幼虫血淋巴中抗真菌肽的诱导方法比较及抗真菌活性[J];昆虫学报;2007年10期

7 孙恩涛;秦志辉;;昆虫抗菌肽研究进展[J];热带病与寄生虫学;2006年01期

8 王婷婷;金小宝;朱家勇;刘雷山;;顺式串联家蝇抗菌肽Attacin基因真核表达载体的构建[J];中国热带医学;2006年03期

9 包怀恩;我国亚洲牛带绦虫研究的现状和展望[J];热带医学杂志;2002年03期

10 陈艳,李金富;家蝇幼虫组织匀浆液抗病毒活性的研究[J];热带医学杂志;2004年02期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 蔡英姬;金哲洙;;棒曲霉菌中抗真菌肽的分离与纯化[J];延边大学医学学报;2006年04期

中国重要会议论文全文数据库 前4条

1 黄旭;谢伟军;龚蓁蓁;;银杏中的新抗真菌肽的研究[A];中国毒理学会生物毒素毒理专业委员会第4次、中国生物化学与分子生物学会毒素专业组第5次学术研讨会论文摘要[C];2001年

2 肖业臣;李校X;黄亚东;曹阳;;果蝇抗真菌肽新基因的克隆与序列分析[A];中国生物工程学会2006年学术年会暨全国生物反应器学术研讨会论文摘要集[C];2006年

3 肖业臣;温硕洋;曹阳;钟仰进;魏剑波;庄楚雄;刘吉平;邓小娟;;果蝇Drosomycin抗真菌肽基因家族新成员drol的研究[A];中国的遗传学研究——中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年

4 温硕洋;肖业臣;曹阳;庄楚雄;钟仰进;魏剑波;冯佩富;;棉铃虫新的抗真菌肽拟靶基因部分序列的克隆研究[A];中国的遗传学研究——中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年

中国硕士学位论文全文数据库 前3条

1 陈刚;天然抗真菌肽APS的分离纯化、理化特性及其生物活性研究　[D];四川大学;2003年

2 陈娜;芽孢杆菌AH-E-1抗真菌肽的分离纯化、性质及产生条件研究[D];天津大学;2012年

3 熊前程;抗真菌肽CGA-N46基因多顺反子表达载体的构建与鉴定[D];河南工业大学;2011年

，

本文编号：1308208