骨髓间充质干细胞加重血管钙化的机制研究

发布时间：2017-12-19 22:10

  本文关键词：骨髓间充质干细胞加重血管钙化的机制研究　出处：《华中科技大学》2013年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：第一部分动脉组织体外调控骨髓间充质干细胞分化的研究 目的：研究血管中骨髓间充质干细胞在不同钙化环境中的分化情况。 方法：应用华法林，维生素K1及维生素D3制作血管钙化模型。造模成功后，分别取正常SD大鼠动脉和大鼠钙化动脉与MSC共培养，实验分为3组：正常组为正常动脉+MSC；钙化诱导剂组为钙化诱导剂+正常动脉+MSC；钙化组为钙化动脉+MSC。各组均培养3周，实验第10天时采用ELISA法检测OPG蛋白分泌情况，，3周后倒置显微镜观察各组细胞形态变化，ELISA法检测总蛋白含量和碱性磷酸酶（ALP）活性，Real-time PCR法检测各组Ror2mRNA表达。 结果：钙化组中MSC自发增殖向成骨样细胞分化。与正常组相比，钙化组中总蛋白含量、骨代谢标志物ALP活性、骨保护素OPG均明显升高，而Ror2mRNA表达则显著低于正常组。钙化诱导剂组中MSC未向成骨样细胞分化，与正常组相比，ALP活性无明显差异，但总蛋白含量及OPG均升高，Ror2mRNA表达则低于正常组。其中，钙化组Ror2mRNA表达明显低于钙化诱导剂组。 结论：在已钙化血管中，MSC向成骨样细胞转化，加重血管钙化；而当血管尚未发生钙化时，钙化诱导剂不能诱导MSC向成骨样细胞分化，而是向平滑肌细胞分化，修复血管，这可能与Ror2mRNA表达不同有关。 第二部分血管平滑肌细胞体外调控骨髓间充质干细胞分化的研究 目的：研究MSC分别与正常平滑肌细胞和钙化平滑肌细胞直接共培养时的分化情况。 方法：将MSC分别与钙化平滑肌细胞和正常平滑肌细胞按不同比例共培养于六孔板中，具体比例如下：SMC15×104或钙化SMC15×104； SMC10×104或钙化SMC10×104： MSC5×104； SMC5×104或钙化SMC5×104：MSC10×104。共培养9天，9天后细胞融合长满六孔板。采用ELISA法和AKP染色法检测成骨标志物碱性磷酸酶ALP，Western blot法检测各组WNT5a的表达，Real-time PCR法检测各组Ror2mRNA表达。 结果：CS15组、CS5M10组、CS10M5组的ALP活性以及WNT5a的表达均明显高于S15组、S5M10+OS组、S10M5+OS组(P0.001)，相反，Ror2mRNA表达则明显低于S15组、S5M10+OS组、S10M5+OS组(P0.001)。 结论：MSC分别与正常平滑肌细胞和钙化平滑肌细胞直接共培养时可以分成不同类型的细胞，且与MSC的数量成正比。此外，Wnt5a/Ror2信号通路可能在MSC的分化中起着重要作用。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2

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本文编号：1309607