结核分枝杆菌抗原HBHA在耻垢分枝杆菌中的重组表达和鉴定

发布时间：2017-12-19 23:00

  本文关键词：结核分枝杆菌抗原HBHA在耻垢分枝杆菌中的重组表达和鉴定　出处：《华中科技大学学报(医学版)》2015年04期 　论文类型：期刊论文

  更多相关文章： 肝素结合血凝素(HBHA) 耻垢分枝杆菌 结核病 表达

【摘要】：目的构建高效表达结核分枝杆菌抗原肝素结合血凝素(HBHA)的重组耻垢分枝杆菌。方法针对结核分枝杆菌H37Rv株HBHA的编码基因Rv0475设计特异引物,利用PCR技术从细菌基因组中获取目的基因,并克隆入pET-30b(+)载体构建重组原核表达质粒pETHBHA,经IPTG诱导pETHBHA转化的重组E.coli BL21(DE3)细菌,Ni柱纯化携带C-端His标签的HBHA蛋白,并制备鼠源多克隆抗体。PCR扩增含自身启动子和调节序列的Rv0475基因并克隆入大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭载体pMV261,构建重组分枝杆菌表达质粒pMVHBHA,并经酶切鉴定证实后,电转化入耻垢分枝杆菌,涂布含卡那霉素的7H11平板,挑选抗性克隆并扩大培养,15%SDS-PAGE和Western blot鉴定重组耻垢分枝杆菌的表达。结果分别成功构建重组原核表达质粒pETHBHA和重组分枝杆菌表达质粒pMVHBHA;重组蛋白HBHA在大肠埃希菌中成功表达并纯化后,BCA蛋白浓度测定试剂盒测定浓度为1.912 5μg/μL,用其制备鼠源多抗;证实HBHA利用其自身的启动子和调节序列在重组耻垢分枝杆菌中表达。结论成功构建过表达HBHA的重组耻垢分枝杆菌,为研究该蛋白参与结核病的致病机制和研发新型疫苗和诊断试剂奠定了基础。
【作者单位】： 华中科技大学同济医学院附属协和医院第一临床学院;华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物学系;
【基金】：华中科技大学大学生创新创业计划项目(No.教育部高教司函[2014]24号)
【分类号】：R378.911
【正文快照】： 结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)感染所引起的、严重危害人类健康的传染病之一。卡介苗(M.bovisBCG)是预防TB的唯一疫苗,但对成人结核缺乏预防能力。肝素结合血凝素(HBHA)是M.tb的重要毒力因子[1],其甲基化部分具有重要的免疫学特

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 江鹰;赵善民;师长宏;;HBHA在结核病研究中的应用[J];现代生物医学进展;2012年17期

2 江莉莎;邬亭亭;刘平;郭述良;;分枝杆菌噬菌体Leo的生物学和基因组学特征[J];华中科技大学学报(医学版);2014年05期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 周珊;徐修礼;马越云;刘家云;程晓东;张倩;郝晓柯;;HBHA截短体蛋白的表达纯化及其诊断活性研究[J];国际检验医学杂志;2014年24期

2 李恒德;左建宏;王麓山;;结核分枝杆菌耐药机制研究进展[J];现代生物医学进展;2013年11期

3 姚义勇;江莉莎;张莉;郭述良;柳岩;;分枝杆菌噬菌体Guo1环状基因组特征及生物学特性分析[J];微生物学通报;2015年08期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 葛淑敏;非结核分枝杆菌的鉴定及胞内分枝杆菌HBHA表达和实验免疫研究[D];吉林农业大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前5条

1 乔亚红;抗原诱发的γ-干扰素释放试验在结核性胸膜炎诊断中的应用研究[D];郑州大学;2013年

2 陈诗涛;牛布鲁氏菌和牛分枝杆菌抗原的基因克隆、表达和抗原性鉴定[D];暨南大学;2013年

3 马骏;结核杆菌对不同人工关节假体材料黏附能力的实验研究[D];新疆医科大学;2013年

4 缪海锋;T-SPOT试验在临床结核诊断中的应用价值研究[D];浙江大学;2013年

5 李娜娜;IFN-γ释放试验的临床应用及相关细胞因子在结核分枝杆菌感染中表达的研究[D];遵义医学院;2014年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 彭丽;陈保文;罗永艾;沈小兵;黎友伦;苏城;王国治;;噬菌体D29对耐药结核病豚鼠的治疗作用[J];第四军医大学学报;2009年17期

2 甘易玲;刘平;邬亭亭;郭述良;;分枝杆菌噬菌体DNAⅢ的遗传学信息及抗结核潜力初步研究[J];上海交通大学学报(医学版);2013年10期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 徐苗,陈保文,沈小兵,苏城,罗永艾,王国治;耻垢分枝杆菌作为免疫调节剂的研究[J];中华微生物学和免疫学杂志;2005年09期

2 湛W歐，

本文编号：1309746