吗啡孵育对HU210诱导的大鼠脑星形胶质细胞内钙振荡的影响

发布时间：2017-12-20 07:40

  本文关键词：吗啡孵育对HU210诱导的大鼠脑星形胶质细胞内钙振荡的影响　出处：《陕西师范大学》2013年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：神经胶质细胞是一类广泛分布于中枢神经系统和周围神经系统中的神经组织细胞。随着对胶质细胞的进一步研究,现在的观点认为在中枢神经系统中胶质细胞不仅简单的起着支持、绝缘、屏障和营养的作用,而且在突触的形成及可塑性、神经递质的分泌和摄取等方面也发挥重要作用,并以此来调控神经元的信息传递及其各项生理活动。在中枢神经系统中,星形胶质细胞是胶质细胞中数量最多、体积最大的一种亚型细胞。神经元兴奋的表现方式是产生动作电位,与其不同的是,星形胶质细胞主要是通过其胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化来表现细胞的兴奋性,而该类细胞兴奋后可通过细胞内多种信号通路指导胶质递质合成并将其释放,被释放的胶质递质进而反作用于神经元,从而调节突触的功能及突触可塑性,因此关于星形胶质细胞[Ca2+]i的变化就成为近年来研究的热点。 本实验以原代培养的Sprague-Dawley (SD)大鼠大脑皮层星形胶质细胞为模型,采用吗啡中、短期孵育的作用模式,通过观察大麻素急性作用于培养的细胞所引起胞内钙信号的变化程度来了解大麻素类药物对星形胶质细胞的影响及吗啡孵育对HU210作用效应的影响。 实验以1-3d龄的SD大鼠为实验材料,通过无菌操作技术对大鼠大脑皮层中的星形胶质细胞进行分离及纯化培养,使培养出的星形胶质细胞纯度达到95%及以上,并应用GFAP免疫组化法对其纯度进行鉴定。在检测细胞内钙离子浓度变化时选用Fura-2/AM为Ca2+指示剂,通过灌流HU210分别观察加药前后对照组、吗啡组和纳洛酮+吗啡组的胶质细胞[Ca2+]i的变化。此外,实验还分别用AM281(CB1受体的拮抗剂)和纳洛酮(阿片受体的拮抗剂)孵育星形胶质细胞,目的是进一步观察在阻断CB1受体和阿片受体后灌流HU210对胶质细胞胞内钙振荡的影响。 实验结果显示,HU210分别灌流经Fura-2/AM加载后的对照组、吗啡组和纳洛酮+吗啡组的星形胶质细胞,各组大部分细胞荧光值F340/F380明显升高,这表明,HU210可明显诱导各组细胞[Ca2+]i升高。而将HU210发挥作用的相应受体拮抗后,星形胶质细胞[Ca2+]i的升高现象被显著抑制,由此表明HU210可通过CB1受体诱导星形胶质细胞[Ca2+]i的升高。而吗啡组与对照组细胞的[Ca2+]i升高幅值存在差异,加纳洛酮干预后,该差异消失,由此表明吗啡中期孵育可影响HU210的作用效应且这种效应可被纳洛酮反转。 综合以上结果可知：HU210可通过CB1受体急性作用星形胶质细胞并引起细胞内[Ca2+]i的升高,而经吗啡孵育不同时间后,HU210作用于星形胶质细胞引起的[Ca2+]i升高的效应受到影响,纳洛酮可反转吗啡对HU210的这一影响,这一原因可能是由于吗啡发挥生理作用所依赖的阿片受体信号系统与HU210发挥作用所依赖的大麻素信号系统间存在相互影响。
【学位授予单位】：陕西师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2

【参考文献】

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1 谢燕,余争平,朱光绪,方强,江海洪,;吗啡对大鼠培养海马神经元钙离子作用机制的研究[J];第三军医大学学报;2002年02期

2 熊加祥,黎海蒂,李希成;吗啡对大鼠海马星形胶质细胞[Ca~(2+)]i的影响[J];第三军医大学学报;2003年03期

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本文编号：1311308