电刺激对维生素C诱导iPSCs向心肌细胞分化影响的实验研究

发布时间：2017-12-22 02:09

  本文关键词：电刺激对维生素C诱导iPSCs向心肌细胞分化影响的实验研究　出处：《重庆医科大学》2013年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的探讨电刺激在体外对维生素C诱导iPSCs向心肌细胞分化的作用。 方法1.复苏小鼠来源的iPSCs，接种于丝裂霉素C预处理的MEF饲养层上，通过光学显微镜观察iPSCs生长的形态变化特征，荧光显微镜观察干细胞全能性基因Oct-4的表达以及碱性磷酸酶（AP）染色三个方面鉴定未分化的iPSCs。 2.采用悬滴法使iPSCs形成EBs，维生素C诱导其分化，按是否给予电刺激将其分为电刺激组与非电刺激组。观察各组细胞生长情况，记录各组拟胚体出现跳动的时间和跳动拟胚体的数量，计算心肌细胞分化率。共聚焦显微镜成像结合免疫荧光细胞化学检测心肌特异性肌钙蛋白（c-TnT）的表达。RT-PCR检测Oct-4、心肌早期特异性转录因子GATA-4和心肌特异性肌球蛋白重链α-MHC的基因表达。 结果1.接种于MEF饲养层的iPSCs呈散在分布的克隆团贴壁生长，iPSCs集落中央的细胞排列紧密，边缘折光性强，与饲养层细胞界限清楚；在荧光显微镜下，GFP转Oct-4基因的iPSCs细胞呈现绿色荧光集落（Oct-4阳性）；AP染色显示，iPSCs克隆团着深紫色。 2.两组在诱导分化过程中均出现自发搏动的拟胚体，电刺激组拟胚体较非电刺激组分化更快，更早出现自发搏动（3天vs5天），心肌细胞分化率更高[(68.89±5.09）%vs（52.22±3.85）%]，差异有显著性，P0.05。 3.两组搏动区域细胞均表达心肌特异性肌钙蛋白c-TnT，电刺激组细胞c-TnT表达更清楚。 4.在诱导分化过程中，，Oct-4mRNA表达随诱导时间延长逐渐降低，电刺激组较非电刺激组降低更快（P0.05）。两组均检测到心肌细胞特异性标记分子GATA-4和α-MHC的表达。在诱导分化相同时间点，电刺激组GATA-4和α-MHC表达水平均高于非电刺激组（P0.05）。 结论在LIF和丝裂霉素C预处理的MEF饲养层环境中，iPSCs保持未分化状态不断增殖；模拟心脏电学微环境的电刺激在一定程度上有助于维生素C诱导的iPSCs在体外向具有心肌细胞表型特征的细胞分化。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2

【参考文献】

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1 杨梁;张晓刚;魏新伟;;维生素C体外诱导多能干细胞向心肌细胞的分化[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年23期

本文编号：1318012