人谷胱甘肽过氧化物酶-7原核表达、纯化及功能研究

发布时间：2017-12-27 04:23

本文关键词：人谷胱甘肽过氧化物酶-7原核表达、纯化及功能研究　出处：《上海交通大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：谷胱甘肽过氧化物酶7(Glutathione peroxidase7，GPx7)的体外GPx活性较低，但其在细胞内发挥着独特的生理活性。利用原核细胞表达人源GPx7，使其在细胞外针对ROS而发挥的抑制肿瘤增殖和促进骨髓损伤的修复作用是一个新颖的、值得研究的问题。本论文研究了GPx7原核表达载体的构建、原核细胞表达、蛋白纯化、抑制肿瘤细胞增殖和对小鼠化疗药物骨髓损伤的再生的影响，，以及细胞内外的抗氧化活性。人源GPx7基因片段重组入原核表达质粒pET24a，成功构建原核表达质粒pET24a-GPx7，在大肠杆菌宿主BL21(DE3)中经诱导以可溶形式表达。初步建立了Sulfopropyl阳离子交换和Superdex75分子排阻2步层析法纯化E.coli BL21(DE3)表达的GPx7，SDS-PAGE电泳结果为单一条带的蛋白质经Western blotting鉴定为GPx7。GPx7对肿瘤细胞生长具有一定的抑制作用。在A549肿瘤细胞中转染真细胞表达质粒pCDNA3.1(-)-GPx7，瞬时高表达的GPx7显著抑制肿瘤细胞的体外增殖(p0.05)。GPx7对S180荷瘤小鼠的肿瘤抑制率为29.26%。GPx7能缓解化疗药物5-FU对骨髓细胞的氧化应激损伤，在5-FU化疗药物骨髓损伤模型小鼠中，注射GPx7后在第9、11、13天能显著促进骨髓损伤小鼠的骨髓细胞再生(p0.05)，最终显著增加损伤小鼠外周血白细胞和血小板的数量。过表达GPx7的肺癌细胞A549增殖受到抑制，同时细胞内ROS显著下降(p0.05)，提示GPx7通过调控ROS以干扰肿瘤细胞的增殖。
[Abstract]:The GPx activity of glutathione peroxidase 7 (Glutathione peroxidase7, GPx7) in vitro is low, but it plays a unique physiological activity in the cell. The use of prokaryotic cells to express human GPx7 and make it play an important role in inhibiting ROS proliferation and promoting bone marrow repair in vitro is a new and worthwhile problem. In this paper, we studied the construction of prokaryotic expression vector GPx7, prokaryotic cell expression, protein purification, inhibition of tumor cell proliferation and regeneration of bone marrow injury of chemotherapeutic drugs in mice, and the antioxidant activity of cells.
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R3411

【参考文献】