初免加强免疫增强肺炎链球菌表面黏附素（psaA）核酸疫苗免疫原性研究

发布时间：2017-12-27 13:08

本文关键词：初免加强免疫增强肺炎链球菌表面黏附素（psaA）核酸疫苗免疫原性研究　出处：《复旦大学》2009年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 肺炎链球菌是导致细菌性肺炎、菌血症、脑膜炎等侵袭性疾病的重要原因,同时也是导致急性中耳炎和鼻窦炎的主要病原菌。由于抗生素的广泛运用,已导致多种耐药菌的产生。已经用于临床的预防疫苗主要为23价多糖疫苗和7价多糖蛋白结合疫苗,但前者是T细胞非依赖性抗原,对免疫系统发育不完善的2岁以下婴幼儿以及老年人的保护性有限;后者包含的血清型有限,而且生产成本高,不适合在我国大范围应用。 PsaA是肺炎链球菌毒力因子之一,属于金属结合脂蛋白家族成员,分子量为37-kDa,有309个氨基酸残基构成,其氨基酸序列和免疫原性高度保守,属于ABC-型转运蛋白,PsaA在ABC型转运体系中属于细胞膜外蛋白质,一项功能是负责结合金属锰离子和锌离子;另一项功能是肺炎链球菌的一种黏附素。本研究根据基因库中肺炎链球菌表面黏附素的基因序列(序列号U53509),设计引物,运用PCR法从肺炎链球菌基因组中克隆出psaA基因,回收PCR产物并对其进行酶切,将其分别插入到pVAX1真核表达载体和pET28a原核表达载体,分别构建出表达PsaA的核酸疫苗pVAX1-psaA及其重组原核表达载体pET28a-psaA,并对它们进行鉴定。将pET28a-psaA转化大肠杆菌BL21(DE3),经ITPG诱导,采用镍柱亲和层析法纯化PsaA蛋白,Western-blot分析其抗原性。 10只BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,将构建正确的核酸疫苗pVAX1-psaA对BALB/c小鼠(n=5)进行3次核酸疫苗免疫,隔周免疫一次,共3次,为初免,第三次免疫2周后,腹腔免疫50μg重组PsaA纯化蛋白。对照组仅隔周免疫3针100μg pVAX1空载体,加强免疫50μl生理盐水。所有动物分别于0、2、4、6、7周尾静脉取血,间接ELISA法测定其抗PsaA抗体水平。本实验结果表明我们成功克隆出psaA基因并实现其亚克隆;所构建的psaA核酸疫苗序列正确,同时成功实现了PsaA蛋白纯化;动物实验结果表明核酸疫苗初免后蛋白加强组的抗PsaA抗体滴度明显高于其他组别(P＜0.01)。采用核酸疫苗初免-蛋白加强免疫策略能显著增强肺炎链球菌psaA核酸疫苗的免疫原性,为研制开发用于临床的肺炎球菌核酸疫苗奠定了基础。
[Abstract]:Streptococcus pneumoniae is an important cause of invasive diseases such as bacterial pneumonia, bacteremia and meningitis. It is also the main pathogen causing acute otitis media and sinusitis. The widespread use of antibiotics has led to a variety of drug-resistant bacteria. Has been used for clinical preventive vaccine for 23 valent polysaccharide vaccine and 7 valent polysaccharide conjugated vaccine, but the former is T cell dependent antigen, on the immune system of immature infants under 2 years old and the elderly protection Co.; the latter includes the serotype is limited, and the production cost is high, not suitable for in a wide range of application in china.
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R392

【共引文献】