Calpain及抑制剂对小鼠RAW264.7细胞RANKL-RANK通路诱导的破骨细胞形成机制的研究

发布时间：2017-12-27 20:37

  本文关键词：Calpain及抑制剂对小鼠RAW264.7细胞RANKL-RANK通路诱导的破骨细胞形成机制的研究　出处：《北京协和医学院》2010年博士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： Calpain 破骨细胞分化 RANKL RAW264.7细胞 骨凹陷

【摘要】：目的 Calpain是一种与破骨细胞活化相关的蛋白水解酶,可能是抑制破骨细胞活化的干预靶点。本研究旨在探讨Calpain在小鼠RAW264.7细胞中对RANKL诱导的破骨细胞分化的作用机制,以及抑制Calpain对RANKL诱导的破骨细胞活化的作用。 方法 在小鼠RAW264.7细胞中,分为以下6组:RANKLO ng/ml,20ng/ml,50ng/ml,70ng/ml,100ng/ml, RANKL50ng/ml+Calpastatin50nM,共诱导细胞分化6天。在第2天对RANKLO-100ng/ml共5组测定Calpain活性,在第6天对所有6组进行TRAP染色和阳性细胞计数、破骨细胞骨凹陷分析,验证破骨细胞是否分化成熟。另培养小鼠RAW264.7细胞,均使用RANKL50ng/ml进行诱导,分为4组：RANKL6h, RANKL24h, RANKL48h,[RANKL+Calpastatin50nM]48h,使用Western Blot方法测定各组的NFκB和c-Fos的蛋白表达,比较Calpastatin抑制前后两种蛋白表达量的变化。 结果 在小鼠RAW264.7细胞中,Calpain活性和TRAP阳性细胞数以及骨凹陷面积均呈RANKL浓度依赖性递增。使用Calpastatin抑制Calpain活性后与单纯以RANKL诱导相比,可以使TRAP阳性细胞数和骨凹陷面积显著降低。此外,随着RANKL诱导时间的延长,NFκB和c-Fos的蛋白表达水平均呈递增趋势。而以Calpastatin抑制Calpain活性后与单纯以RANKL诱导相比,此两种蛋白的表达量显著降低。 结论 在RANKL诱导的小鼠RAW264.7细胞分化体系中,Calpain活性与破骨细胞活化程度呈正相关。抑制Calpain可以有效抑制小鼠RAW264.7细胞在RANKL诱导下向破骨细胞的分化。抑制Calpain可以抑制RANKL诱导的NFKB和c-Fos蛋白表达的增加。
[Abstract]:objective
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R363

【共引文献】

相关期刊论文 前10条

1 Thomas M. Bodenstine;Benjamin H. Beck;Leah M. Cook;Aimen Ismail;J. Kent Powers;Andrea M. Mastro;Danny R. Welch;;Pre-osteoblastic MC3T3-E1 cells promote breast cancer growth in bone in a murine xenograft model[J];癌症;2011年03期

2 李明明;张卫东;宗志红;胡振华;王旭晖;;唑来膦酸对肺癌95D细胞增殖和侵袭抑制作用的研究[J];中国肺癌杂志;2009年03期

3 李国东;蔡郑东;;转移性骨肿瘤相关分子机制研究进展[J];国际骨科学杂志;2007年04期

4 刘莉;罗云;王敏;;核转录因子-κB受体活化因子及其配体和骨保护蛋白系统在骨构建与骨改建中的作用[J];国际口腔医学杂志;2009年03期

5 谢妮娜;宋光泰;;乳牙生理性根吸收机制的研究进展[J];国际口腔医学杂志;2010年03期

6 徐清楠;丁芹;;骨形态发生蛋白7对肝癌细胞株Huh7增殖及迁移作用的影响研究[J];中国医药导刊;2013年06期

7 唐艳丽;邵予;孙万邦;;基质金属蛋白酶在类风湿关节炎免疫致病机制及信号转导中的研究进展[J];广东医学;2013年17期

8 李鹏;夏琳;扈英伟;徐欣;;免疫反应在牙周病牙槽骨吸收中的作用[J];北京口腔医学;2013年05期

9 关振宇;赵学武;艾纯华;卞传华;;骨保护素的临床应用[J];吉林医学;2010年16期

10 刘霏霏;李会;李运峰;姜楠;胡静;;活性维生素D_3改善骨质疏松状态下钛种植体的稳定性[J];临床口腔医学杂志;2013年06期

相关博士学位论文 前10条

1 施朝龄;单核细胞趋化蛋白-1对前列腺癌PC-3M细胞系转移作用的体外实验研究[D];吉林大学;2011年

2 艾纯华;联合应用重组人骨保护素和磷酸钙骨水泥增强骨质疏松转子间区力学性能的实验研究[D];吉林大学;2011年

3 孙嗣国;破骨细胞形成的分子机制及溶骨性病变中破骨细胞的局部调控[D];第四军医大学;2007年

4 俞珊;消痰通络凝胶对骨癌痛大鼠骨代谢及辣椒素受体1表达的影响[D];第二军医大学;2009年

5 丁召;腺病毒介导的反义细胞外信号调节激酶2基因治疗抑制肾小管上皮—间充质转化并延缓大鼠移植肾肾病[D];华中科技大学;2009年

6 顾建红;1α,25-(OH)_2D_3介导成骨细胞影响破骨细胞形成及活化的研究[D];扬州大学;2009年

7 房雪峰;SOX2基因在肿瘤中的作用及其分子机理的研究[D];浙江大学;2010年

8 黄东;NR2B在小鼠骨癌痛中的作用及机制研究[D];中南大学;2010年

9 张燕;DDR2在成骨细胞分化过程中的作用研究[D];第四军医大学;2010年

10 盛益华;溃疡性结肠炎大鼠肺损伤细胞凋亡机制及中药单体干预作用机制研究[D];北京中医药大学;2013年

相关硕士学位论文 前10条

1 曾俊;骨形成蛋白7与胰岛素分泌、肥胖及其相关代谢紊乱的关系研究[D];第三军医大学;2011年

2 孙颖娇;芬太尼透皮贴剂和吗啡缓释片治疗中重度癌痛的疗效对比[D];山东大学;2011年

3 夏辉;ATP敏感性钾离子通道在骨癌痛大鼠痛觉超敏中的作用[D];华中科技大学;2011年

4 鲁琛;热休克蛋白90调节HEK293细胞中c-Jun蛋白的稳定性的相关研究[D];南京师范大学;2007年

5 张海龙;重组人骨保护素对聚乙烯颗粒刺激破骨细胞功能的影响[D];重庆医科大学;2007年

6 常俊;二膦酸盐对人骨肉瘤细胞株MG-63细胞生长及OPG/RANKL表达影响的实验研究[D];安徽医科大学;2008年

7 韩慧;TGF-β1和TGF-β1型受体蛋白及其mRNA在胃癌中的表达及临床意义研究[D];青岛大学;2008年

8 童民锋;c-fos基因在大鼠创伤性颅脑损伤中不同阶段表达水平与细胞凋亡关系的研究[D];浙江大学;2008年

9 徐慧慧;BMP7通过BMPR1A、BMPR1B抑制肺大细胞癌NCI-H460细胞的增殖[D];中国医科大学;2009年

10 李余发;转移相关基因FMNL2在结直肠癌上皮—间质转化中的作用机制[D];南方医科大学;2009年

，

本文编号：1343128