金黄色葡萄球菌的分子分型及其Panton-Valentine杀白细胞素基因的克隆与表达

发布时间：2017-12-27 23:07

本文关键词：金黄色葡萄球菌的分子分型及其Panton-Valentine杀白细胞素基因的克隆与表达　出处：《中国人民解放军军医进修学院》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的：了解我院致血流感染金黄色葡萄球菌的分子流行病学特征；筛查血流感染金黄色葡萄球菌Panton—Valentine杀白细胞素基因(pvl基因)携带情况；构建lukS-PV和lukF-PV基因表达载体,并在大肠杆菌中表达相应蛋白。方法：收集2006年1月至2008年12月期间我院临床分离的致血流感染金黄色葡萄球菌菌株(共47株),标本来源均为患者静脉血。琼脂平板稀释法检测所有菌株对多种抗菌药物的耐药性,PCR方法检测pvl基因,应用DiversiLabTM Rep-PCR菌株分型系统进行菌株的同源性分析；对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)进行葡萄球菌染色体mec(SCCmec)分型、脉冲场凝胶电泳(Pulse-field Electrophoresis, PFGE)分型以及ST239型别的快速筛查；综合分型结果和药敏试验结果,挑选部分代表菌株进行多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing, MLST)。通过分子生物学技术,克隆并表达lukS-PV和lukF-PV基因。结果：47株致血流感染金黄色葡萄球菌菌株中,pvl因检出率为4.3%(2／47)。MRSA24株,占51.1%,所有MRSA均为SCCmecⅢ型菌株,其中22株(91.67%)为ST239; DiversiLabTM Rep-PCR菌株分型系统将47株金黄色葡萄球菌分为A～L共12个型,其中A型为最主要的型,共22株,占46.8%,所有的MRSA均属于A、B两型；脉冲场凝胶电泳技术将MRSA分为A～F共6个型别,A型有A1～A6六个亚型,B型有2个亚型。成功克隆lukS-PV和lukF-PV基因,构建重组表达质粒lukF-PV-pET28a(+)知lukS-PV-pET28a(+),在宿主菌BL21中表达重组蛋白取得初步成功。结论：2006年1月至2008年12月我院分离的临床血流感染金黄色葡萄球菌中甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌绝大部分为多重耐药克隆MRSA-ST239-SCCmecⅢ型。这些MRSA在分子水平上有较近的亲缘关系,一些病房可能存在暴发流行。致血流感染金黄色葡萄球菌中的pvl基因检出率不高,为4.3%：lukS-PV和lukF-PV基因的成功克隆及初步表达为建立Panton—Valentine杀白细胞素(PVL)的免疫检测方法奠定基础。
[Abstract]:Objective: To investigate the molecular epidemiology of bloodstream infections in our hospital caused by Staphylococcus aureus; Staphylococcus aureus Panton Valentine screening bloodstream infection Leucocidin gene (PVL gene) carrying; construct the expression vector of lukS-PV gene and lukF-PV gene and protein expression in Escherichia coli. Methods: a total of 47 strains of Staphylococcus aureus were isolated from January 2006 to December 2008 in our hospital. Detection of agar dilution method all strains on a variety of antimicrobial agents, PCR method for detection of PVL gene, homology analysis of Rep-PCR strains using DiversiLabTM strain typing system; against methicillin-resistant Staphylococcus aureus (Methicillin-resistant Staphylococcus, aureus, MRSA) of staphylococcal chromosome mec (SCCmec) typing and pulsed field gel electrophoresis (Pulse-field Electrophoresis, PFGE) classification and rapid screening of type ST239; comprehensive classification results and the results of drug sensitive test, choose some representative strains for multilocus sequence typing (Multilocus Sequence, Typing, MLST). LukS-PV and lukF-PV genes were cloned and expressed by molecular biology techniques.
【学位授予单位】：中国人民解放军军医进修学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R378

【参考文献】