RHAG基因克隆与多态性研究

发布时间：2017-12-28 17:08

本文关键词：RHAG基因克隆与多态性研究　出处：《华东师范大学》2009年硕士论文　论文类型：学位论文

更多相关文章： RHD RHAG 多态性 pcDNA3.1~+载体

【摘要】： RH血型系统是人类30个血型系统中最复杂的,至少由45种独立抗原组成,其中D抗原免疫性最强。Rh抗原的强烈免疫原性使这一系统在输血治疗中有重要的临床价值;Rh抗原涉及输血中的溶血反应、新生儿溶血症(HDN)和自身免疫溶血贫血症。RHAG血型系统是人类第30个血型系统,目前由3个抗原组成,由RHAG基因控制。虽然RHAG与RHD属于不同的血型系统,但两者密切相关。RH血型系统的主要抗原D同时受到RHAG基因的调控,RHAG基因的失活可以导致RH系统所有抗原的缺失。这两个基因具有高度同源性,同属与人类RH基因家族,都是由10个外显子组成的大约75Kb的DNA,其中外显子2-9区域相似程度很高,说明RHAG和RHD基因可能是由同一个祖先经过染色体插入后在两个分隔的位点上形成的。RHD位于1号染色体的1p36.13～p34.3,编码RhD蛋白。RHAG基因位于6号染色体的6p11～p21.1,编码Rh相关糖蛋白RhAG。 RhAG糖蛋白参与红细胞膜表面Rh复合物的形成。研究表明,Rh复合物的主体可能是一个由Rh亚基和RhAG亚基组成的三聚体结构,连接有CD47、LW和GPB等Rh相关抗原,并与带3蛋白相连,在红细胞膜上形成Rh巨复合体。当RHD基因缺失或某个位点发生突变时,编码的相应氨基酸发生变化,导致蛋白结构和功能都发生变化,最终会引起Rh抗原的变化。RhAG蛋白不直接表达Rh抗原性,但会影响RhD和RhCE蛋白的表达。RHAG基因突变会产生十分罕见的Rh缺失综合症Rh_(null)和Rh_(mod),这种表型的红细胞上缺乏所有Rh相关抗原。目前研究表明,引起Rh缺失表型的分子机制有两种,一种是由于RHD和RHCE基因位座出现沉默基因纯合子,另一种是RH基因正常,但RHAG基因是一种无活性的突变。但也有些Rh_(null)是RHAG单一一个或两个错义突变形成的,导致某个氨基酸发生置换,这些微小的变化使RHAG基因失活。对Rh_(null)表型红细胞的结构和功能变化,目前已有详尽研究。Rh缺失表型对红细胞抗原的影响已超过Rh血型系统,在Rh_(null)和Rh_(mod)红细胞上,LW,GPB和CD47等抗原也缺少或至少减弱表达。通过RT-PCR和测序,发现Rh_(null)红细胞具有正常RHD和RHCEcDNA,说明Rh_(null)并非是由RHD或RHCE基因发生突变所引起的。而对RHAG的RT-PCR分析显示,Rh_(null)红细胞和对照红细胞有明显不同。在这些罕见的Rh_(null)个体中,RHAG基因发生突变,阻止Rh糖蛋白和红细胞膜连接,同时阻止D、C/c、E/e多肽与红细胞膜的连接。由此可见,RhAG对Rh蛋白在红细胞膜上的正确装配非常重要。 RHD基因的多态性较为复杂,在不同人群中也存在差异,RHAG基因相对RHD保守,目前发现RHAG等位基因只有13个,而且都是位于罕见的Rh_(null)和Rh_(mod)个体中。中国人群中RHD阴性可能由多种基因背景引发,其中RHAG基因起了什么作用,仍然未知。至于正常RhD表型个体,特别是中国人群中RHAG基因的表达情况,尚未得到充分研究。因此克隆中国汉族RHD基因正常人群的RHAG基因,测定其序列,并进行多态性分析,有较为重要的研究价值。此外,中国人群的RhD变异型中存在RhD表型与RHD基因不符的情况,这需要对标本的RHAG基因进行检测。 RHD在K562中的表达实验国内外均有成功报道,但RHD和RHAG双基因的克隆及共转染实验仍然具有一定难度,而RHAG突变个体的RHD和RHAG双基因转染实验未见报道。本实验选择了正常RhD表型个体和RhD变异型个体作为实验标本,成功建立了RHAG基因的全长转录本和启动子区域扩增方法,并构建pcDNA3.1~+-RhAG和pcDNA3.1~+-RhD表达载体,同时建立了针对RhD和RhAG蛋白的检测方法,最后得到以下结论: 1.中国人群正常RhD表型个体中,RHAG基因转录本区域不存在多态性现象; 2.中国人群正常RhD表型个体和RhD变异型个体的启动子区域都存在多态性; 3.首次在中国人群RhD变异型标本中发现一例新的RHAG等位基因,该等位基因是RHAG外显子第582位C＞T杂合突变。目前关于黄种人中RHAG基因转录本和启动子区域的研究尚未见报导,本实验首次对中国人群中正常RhD表型个体和RhD变异型个体的RHAG转录本和启动子区域进行探索,研究。并发现RhD变异型标本的RHAG基因基本正常,RHAG对RhD蛋白表达的影响很小。针对对RHAG突变个体,我们仍然需要进一补开展RhD和RhAG的共表达研究。
[Abstract]:The RH blood group system is the most complex of the 30 human blood group systems, consisting of at least 45 independent antigens, of which the D antigen has the strongest immunity. The strong immunogenicity of Rh antigen makes the system valuable in transfusion therapy. Rh antigen is related to hemolytic reaction in transfusion, hemolytic disease of newborn (HDN) and autoimmune hemolytic anemia. The RHAG blood group system is the thirtieth human blood type system, which is currently composed of 3 antigens and is controlled by the RHAG gene.
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R457;R346

【参考文献】