骨髓源性心肌干细胞的年龄性变化以及IGF-1对干细胞衰老的调节作用

发布时间：2017-12-29 01:11

  本文关键词：骨髓源性心肌干细胞的年龄性变化以及IGF-1对干细胞衰老的调节作用　出处：《复旦大学》2009年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】： 目的研究不同年龄大鼠MCSCs超微结构和衰老相关指标的差异,明确年龄因素对MCSCs增殖、存活和向心肌细胞分化的影响,探讨IGF-1对干细胞衰老的调节作用及其机制。方法从幼年、成年和老年雄性SD大鼠骨髓中分离MMSCs,通过单克隆培养技术、c-kit免疫荧光标记和RT-PCR检测心肌早期转录因子Nkx2.5的表达,从MMSCs中筛选出具有心肌特异分化潜能的MCSCs。透射电镜下观察细胞超微结构改变。SA-β-半乳糖苷酶染色和ROS染色检测细胞衰老变化,流式细胞术分析细胞周期。建立体外无血清缺氧模型,Annexin V/PI双标流式细胞术和Hochest 33342染色检测MCSCs存活和凋亡。用BMP-2诱导不同年龄组MCSCs向心肌细胞分化,RT-PCR检测诱导后细胞心肌早期转录因子和心肌特异基因的表达,免疫细胞化学染色检测各年龄组细胞经BMP-2诱导后细胞内cTnT表达的变化。用IGF-1处理老年组MCSCs,SA-β-半乳糖苷酶染色和ROS染色检测细胞衰老指标差异,流式细胞仪分析细胞周期。Hochest 33342染色检测IGF-1处理前后,老年组MCSCs在无血清缺氧培养条件下凋亡细胞比例。用BMP-2诱导各实验组MCSCs向心肌细胞定向分化,RT-PCR检测诱导后细胞Nkx2.5、GATA-4和cTnT、Cx-43 mRNA的表达,免疫细胞化学染色检测细胞内cTnT表达的变化。通过RT-PCR检测IGF-1处理前后细胞中p53、p21和bax mRNA的表达变化以及细胞VEGF、HGF和FGF mRNA的表达差异。结果从MMSCs克隆中筛选出表达心肌早期转录因子Nkx2.5的c-kit~+MMSCs克隆。透射电镜显示老年组MCSCs核浆比减小,胞浆内髓样小体增多。随着年龄增长,处于增殖期的MCSCs比例下降,β-半乳糖苷酶和ROS阳性细胞数目增多。在无血清缺氧条件下培养12h后,老年组凋亡细胞比例明显高于幼年组。用BMP-2诱导后4周,幼年组细胞的Nkx2.5、GATA-4和cTnT、Cx-43 mRNA表达明显,成年组和老年组细胞表达低于幼年组,差异有显著性意义。免疫细胞化学染色显示,BMP-2诱导后幼年组细胞cTnT表达明显,老年组细胞表达较弱。老年组MCSCs经IGF-1处理后,β-半乳糖苷酶阳性细胞数目和ROS阳性细胞数目减少,处于增殖期的细胞比例明显增高。在无血清缺氧条件下培养12h后,老年IGF-1处理组MCSCs凋亡细胞比例较未处理组下降,差异有显著性意义。用BMP-2诱导后4周,老年IGF-1处理组细胞的Nkx2.5、GATA-4和cTnT、Cx-43 mRNA表达较未处理组增强。经IGF-1处理后,老年组MCSCs的p53、p21和bax mRNA表达下调,VEGF、HGF和FGFmRNA表达上调。结论随着年龄增长,MCSCs发生衰老变化,其增殖、存活和向心肌细胞分化能力下降。IGF-1能在一定程度上抑制MCSCs衰老并提高其增殖、存活和向心肌细胞分化的能力。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R329

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本文编号：1348186