高糖诱导血管内皮细胞AE2表达的动态改变及机制

发布时间：2017-12-29 03:23

  本文关键词：高糖诱导血管内皮细胞AE2表达的动态改变及机制　出处：《南昌大学》2009年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:建立体外人脐静脉内皮细胞(HUVECs)高糖损伤模型观察阴离子交换蛋白-2(AE2)表达的动态改变,并从高级糖基化终末产物(AGEs)途径和ROS途径探讨AE2表达的机制。方法:在培养的HUVECs中,分别加入含不同浓度的葡萄糖(GLU,5.5Mm, 17.8mM, 35.6mM, 71.2mM, 142.4mM)和甘露醇(MNT,142.4mM)的DMEM(pH=7.4)孵育48h;另取一批细胞,用含35.6 mM葡萄糖的DMEM分别孵育12h、24h、48h、72h、5d和7d后,收集细胞,采用RT-PCR和Western Blotting法分别检测AE2 mRNA和AE2蛋白的表达的动态改变。在机制研究中,在35.6 mM葡萄糖溶液中分别加入AGEs形成抑制剂(AG,终浓度为5mM)和ROS生成抑制剂(MTZ,终浓度为1μM)处理细胞48h,检测AE2 mRNA和AE2蛋白的表达改变及采用EMSA法测定相应的各组AP1的DNA结合活性。结果:(1)MTT法检测细胞活力:与Control组比,葡萄糖浓度越高,细胞活力越低,相同葡萄糖浓度下培养时间越长细胞活力越低。MNT组与Control组比较,无显著性差异(P 0.05)。(2)高糖(HG)诱导AE2 mRNA和蛋白表达的浓度-效应关系:AE2 mRNA表达水平先随着葡萄糖浓度增加而增加,在35.6 mM和71.2mM达到最大,分别为5.5mM时的2.25和2.30倍(P 0.01,vs 5.5mM),在142.4mM时,AE2 mRNA表达量降低,为5.5mM时的1.98倍(P 0.05,vs 5.5mM),而142.4mM MNT对AE2 mRNA表达无影响(P 0.05,vs 5.5mM)。AE2蛋白表达的改变与AE2mRNA表达变化类似。(3)HG诱导AE2 mRNA和蛋白表达的时间过程:随着35.6 mM GLU处理时间的延长,AE2 mRNA和蛋白的表达水平也随之增加,48h达到最大,随后表达量降低,到168h还维持较高水平(P 0.01,或P 0.05,vs 0 h)。(4)抑制AGEs和ROS途径可下调高糖诱导的AE2 mRNA和蛋白的表达:HG(35.6 mM)可上调AE2 mRNA和蛋白的表达水平,与Control(5.5 mM)相比,具有显著性差异(P 0.01);AG(5 mM)和MTZ(1μM)分别与GLU(35.6 mM)共孵育48 h, AE2 mRNA和蛋白的表达水平显著降低(P 0.05,vs HG),但与Control(5.5 mM)相比,无显著性差异(P 0.05)。(5)HG对AP-1与AE2基因启动子特异序列结合活性的影响:HG(35.6 mM)可明显促进转录因子激活蛋白AP1与AE2基因启动子中特异序列结合,而AG(5 mM)和MTZ(1μM)明显对抗HG诱导的AP1结合活性的升高。结论:高糖以时间和浓度依赖方式上调AE2 mRNA和蛋白的表达;其机制是HG通过AGEs与ROS依赖途径活化转录因子AP1,从而上调AE2 mRNA和蛋白的表达。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R363

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本文编号：1348596