AT受体在血管紧张素Ⅱ引起的内皮祖细胞凋亡中的作用
本文关键词：AT受体在血管紧张素Ⅱ引起的内皮祖细胞凋亡中的作用 出处：《山西医科大学》2010年硕士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】： 目的：1、研究从人脐静脉血中分离出单个核细胞后,加入VEGF、b-FGF后诱导分化成内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)的原代培养方法及EPCs的鉴定方法；2、观察加入高浓度血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ, AngⅡ)的条件下,EPCs是否发生凋亡及不同浓度,同一浓度不同时间段下对其凋亡率的影响；3、观察在高浓度的AngⅡ引起的EPCs凋亡中,AT受体所起的作用。 方法：无菌条件下采集人脐静脉血,采用6%羟乙基淀粉沉降法和密度梯度离心法,两种方法联合从脐带血中分离出单个核细胞,接种于加有生长因子(VEGF及b-FGF)的M199培养皿中,培养7天后,就从以下几点鉴定EPCs:1、倒置显微镜下观察细胞形态。2、多重免疫荧光法处理细胞后,在激光共聚焦显微镜下观察细胞吞噬FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL的能力。3、经免疫组化法对细胞进行染色后,观察CD34和CD133的显色情况。 鉴定EPCs成功后,收集第7天的贴壁细胞,按以下几种情况分组：1、加入不同浓度的AngⅡ(10-4mol/L, 10-6mol/L, 10-8mol/L),干预24h。2、在一定浓度(10-6mol/L)下干预不同时间(12h,24h,48h)。3、加入AT受体拮抗剂干预12h后,再加入10-6mol/L浓度的AngⅡ干预24h,,最后分别用流式细胞仪Pl单染法检测各组EPCs的凋亡率。 数据统计：每组细胞设3个复孔。所有的数据经SPSS13.0统计软件进行处理,统计结果以均数±标注差(x±S)表示,多组间比较采用方差分析,组内比较采用LSD-t检验,检验标准为α=0.05 结果：1、从人脐静脉血中可以分离出单个核细胞后,经细胞因子诱导生成EPCs。2、高浓度的Angll可以促使EPCs凋亡,且当Angll浓度达到10-6mol/L时,EPCs凋亡率呈剂量和时间依赖性；3、当用AngⅡ受体拮抗剂(AT1受体阻滞剂氯沙坦、AT2受体受体阻滞剂PD123319)干预12h后,再加入浓度为10-6mol/L的AngⅡ干预24h,我们可以发现：单用AT1受体阻滞剂可以减少AngⅡ引起的对EPCs的凋亡,但其抑制作用较小,与AngⅡ组相比较无统计学意义(P0.05)。单用AT2受体阻滞剂PD123319对AngⅡ引起的EPCs凋亡率有抑制作用,与AngⅡ组相比,差别有统计学意义(P0.05)。但两者合用时,较单独使用任一阻滞剂,对EPCs凋亡率的抑制作用明显,与AngⅡ组相比差别有显著统计学意义(P0.01)。 结论： 1、VEGF、bFGF可以诱导脐静脉血中单个核细胞分化为EPCs。 2、高浓度AngⅡ可引起EPCs凋亡,并且有时间剂量依赖性。 3、氯沙坦对AngⅡ介导的EPCs凋亡影响较小,PD123319则可部分抑制AngⅡ诱导的凋亡；合用时,抑制凋亡作用明显
[Abstract]:......
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R363
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