转染cxcr4基因对骨髓间充质干细胞向SDF-1趋化能力的影响

发布时间：2017-12-30 05:18

  本文关键词：转染cxcr4基因对骨髓间充质干细胞向SDF-1趋化能力的影响　出处：《福建医科大学》2009年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】： 目的:(1)构建携带cxcr4基因的重组腺病毒载体;(2)将重组腺病毒转染骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),并验证转染后BMSCs表达CXCR4增加;(3)检测转染cxcr4基因后的BMSCs向基质细胞衍生因子1(stromal cell-derivedfactor-1,SDF-1)的定向趋化能力。 方法:(1)分离培养C57BL/6小鼠BMSCs,并通过利用流式细胞仪检测其细胞表面标志物CD44和CD34的表达进行鉴定;(2)通过RT-PCR获取cxcr4基因,亚克隆入pAdTrack-CMV穿梭质粒,线性化后与骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183菌中完成同源重组,筛选并提取重组正确的腺病毒质粒,脂质体转染293细胞包装出成熟的具有感染活力的腺病毒颗粒,利用穿梭质粒中所带绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)报告基因进行病毒滴度和感染活力测定;(3)将携带cxcr4基因的重组腺病毒载体转染BMSCs,分别从荧光表达、蛋白表达来验证转染成功;(4)并通过Transwell趋化实验来验证经cxcr4基因转染的BMSCs向SDF-1趋化能力强于未转染的BMSCs,并观察抗CXCR4中和抗体的干预作用。 结果:(1)成功分离培养及鉴定C57BL/6小鼠BMSCs;(2)成功构建重组腺病毒载体pAdEasy-1-cxcr4,测序结果正确,病毒滴度5.3×10~(10)U/ml;(3)转染cxcr4基因前,BMSCs表达CXCR4水平较低,转染后表达CXCR4水平明显升高;(4)Transwell趋化实验表明转染cxcr4基因后的BMSCs针对SDF-1的趋化能力比未转染的BMSCs明显升高(p＜0.05)。 结论:通过腺病毒载体转染cxcr4基因能够使BMSCs表达CXCR4增加,并能明显提高基因转染后的BMSCs向SDF-1定向趋化的能力。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R346

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本文编号：1353490