大鼠原代肝星状细胞活化后组蛋白修饰水平的观察

发布时间：2017-12-31 19:28

  本文关键词：大鼠原代肝星状细胞活化后组蛋白修饰水平的观察　出处：《中国病理生理杂志》2015年05期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的:观察体外培养大鼠肝星状细胞(HSCs)活化过程中组蛋白修饰的改变以及与HSCs活化指标α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的关系,探讨组蛋白修饰在HSCs活化过程中可能的作用。方法:体外分离、鉴定、培养大鼠HSCs,光镜观察HSCs活化过程中的形态变化,细胞免疫荧光染色和Western blotting检测desmin和α-SMA的表达,比较静止型HSCs和激活型HSCs中H4K12乙酰化、H3K9乙酰化、H3K4二甲基化和H3K9二甲基化的变化。结果:(1)细胞形态学观察结果表明HSCs在培养过程中形态由静息状态向高度分化的肌成纤维细胞转化。细胞免疫荧光染色及Western blotting检测结果显示,分离培养24 h的HSCs有desmin表达,但几乎不表达α-SMA;随着培养时间延长,HSCs内α-SMA和desmin表达逐步增加,至15 d时达到最大。(2)根据HSCs细胞形态变化及HSCs活化标志蛋白检测结果,确定培养24 h的HSCs为静止型HSCs,培养15 d的HSCs为激活型HSCs,分别检测其组蛋白修饰变化。结果显示,与静止型HSCs比较,激活型HSCs中H4K12乙酰化、H3K9乙酰化和H3K9二甲基化修饰水平明显降低(P0.01),而H3K4二甲基化修饰水平明显增加(P0.01),且H3K4二甲基化修饰水平变化与α-SMA表达变化一致。结论:在体外培养HSCs活化过程中,组蛋白修饰发生明显异常,提示组蛋白修饰改变有可能参与了HSCs活化以及肝纤维化的发生。
[Abstract]:Objective: to observe the changes of histone modification during the activation of rat hepatic stellate cells (HSCs) in vitro and the relationship between histone modification and 伪 -SMA-activated index of HSCs. Objective: to investigate the possible role of histone modification in the activation of HSCs. Methods: HSCs were isolated, identified and cultured in vitro. Morphological changes in the process of HSCs activation were observed under light microscope. The expression of desmin and 伪 -SMA was detected by cell immunofluorescence staining and Western blotting, and the acetylation of H4K12 was compared between resting HSCs and activated HSCs. H3K9 acetylation. Changes in H3K4 dimethylation and H3K9 dimethylation. The morphological changes of HSCs from resting state to highly differentiated myofibroblast were observed. Cellular immunofluorescence staining and Western. The results of blotting test showed that. The HSCs isolated for 24 h showed desmin expression, but almost no 伪 -SMA expression. The expression of 伪 -SMA and desmin in HSCs increased gradually with the increase of culture time. According to the morphologic changes of HSCs cells and the detection results of HSCs activation marker protein, the HSCs cultured for 24 h was confirmed as stationary HSCs. The histone modification of HSCs was detected after 15 days of culture. The results showed that the acetylation of H4K12 in activated HSCs was higher than that in static HSCs. The level of H3K9 acetylation and H3K9 dimethylation decreased significantly, while H3K4 dimethylation level increased significantly (P0.01). The change of H3K4 dimethylation level is consistent with the change of 伪 -SMA expression. Conclusion: histone modification is abnormal during HSCs activation in vitro. These results suggest that histone modification may be involved in the activation of HSCs and hepatic fibrosis.
【作者单位】： 贵阳医学院病理生理学教研室;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.81160064) 贵州省科技厅联合基金[黔科合LG字(2012)023号]
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 近年来研究表明,肝星状细胞(hepatic stellatecells,HSCs)的激活是肝纤维化形成的中心环节,HSCs自分泌的多种细胞因子作用于HSCs表面的受体,通过细胞内信号转导,不断刺激HSCs自身分裂增殖,并大量合成和分泌胶原等细胞外基质(extra-cellular matrix,ECM)在肝内沉积,最终导致肝

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：1361155