bFGF在烟草烟雾诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

发布时间：2018-01-01 13:16

  本文关键词：bFGF在烟草烟雾诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用　出处：《中国医科大学》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】： 前言 吸烟是动脉粥样硬化的主要危险因素,对于人类在心血管方面的危害超过了吸烟导致的肺癌。我国是世界上烟草消耗最大的国家,国人60%男性和3%女性吸烟,吸烟者大约有3.5亿人。吸烟对人类健康的危害是巨大的,2000年世界上有169万人因吸烟死于心血管疾病,占全球心血管疾病死亡人数的11%,2002年有500万人的死亡是由吸烟引起的,而我国每年有120万人因吸烟导致死亡。 碱性成纤维细胞生长因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)是肝素结合生长因子家族成员之一,在体内分布广泛。bFGF具有多种生物学特性,促进细胞增殖是其主要作用之一。而血管平滑肌细胞增殖(vascular smooth muscle cell, VSMC)是动脉粥样硬化、再狭窄和肺动脉高压等多种心血管疾病的病理基础。 本研究应用烟草烟雾提取物(cigarette smoke extract, CSE)刺激体外培养的大鼠VSMC,观察其对大鼠VSMC增殖的影响并应用bFGF抗体中和bFGF生物功能,探讨bFGF在CSE刺激VSMC增殖中的作用机制。 实验方法 一、大鼠主动脉血管平滑肌细胞培养 细胞在37℃、5％CO2细胞培养箱中静置培养,每2天换液1次。当细胞长满瓶底80%左右时,用0.25%胰蛋白酶消化传代。取第3-8代的细胞,当细胞长至70%-80%融合时进行实验。 二、实验分组 1、用不同浓度(0,2.5%,5%,10%,20%)CSE刺激VSMC,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)观察细胞增殖变化,免疫细胞化学法测定bFGF和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)蛋白的表达,同时用RT-PCR检测bFGF mRNA表达。 2、用筛选出的最适CSE浓度处理VSMC不同时间(Oh,4h,8h,12h,24h)后,检测bFGFmRNA, bFGF和PCNA蛋白的变化。 3、用bFGF抗体和最适浓度CSE干预VSMC 24h后检测细胞增殖,bFGF和PCNA蛋白表达的变化。 三、实验检测方法 噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2.5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]比色法测定VSMC的增殖；用免疫细胞化学法测定bFGF, PCNA蛋白的表达；用RT-PCR检测bFGF mRNA表达的变化。 实验结果 1、与对照组相比,低浓度(2.5%)CSE组(P0.05)和中浓度(5%)CSE组增加明显(P0.01),而高浓度(10%CSE)或过高浓度(20%CSE)组与对照组相比差异无显著性(P0.05)。bFGFmRNA、蛋白和PCNA蛋白在对照组中有少量表达。与对照组相比,2.5%CSE组表达增加(P0.01),5%CSE组达到高峰。10%、20%CSE组仍高于对照组(P0.01)。 2、对照组(不加CSE组即Oh组)VSMC中有少量bFGF mRNA、蛋白和PCNA蛋白表达。5%CSE刺激4h后细胞内bFGF mRNA、蛋白和PCNA蛋白表达增加(P0.01),bFGFmRNA于8h达高峰；bFGF和PCNA蛋白于12h达高峰。 3、bFGF抗体可显著抑制5%CSE诱导的MTT吸光度(A值)和bFGF、PCNA蛋白表达增加。 结论 CSE可能是通过增加bFGF的表达促进大鼠VSMC的增殖。
[Abstract]:Foreword Smoking is the main risk factor of atherosclerosis, which is more harmful to human cardiovascular than lung cancer caused by smoking. China is the country with the largest consumption of tobacco in the world. 60% men and 3% women smoke in China, about 350 million smokers. Smoking is a great harm to human health. In 2000, 1.69 million people died of cardiovascular diseases because of smoking in the world. In 2002, 5 million deaths were caused by smoking. In China, there are 1.2 million deaths caused by smoking every year. Basic Fibroblast Growth FactorbFGFs are members of heparin binding growth factor family. BFGF is widely distributed in vivo and has many biological characteristics. The proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) and vascular smooth muscle cells (VSMC) is atherosclerosis. Restenosis and pulmonary hypertension are the pathological basis of many cardiovascular diseases. In this study, tobacco smoke extract (smoke extract) was used to stimulate rat VSMC in vitro. To investigate the effect of bFGF on the proliferation of VSMC in rats and to explore the mechanism of bFGF in VSMC proliferation stimulated by CSE, bFGF antibody was used to neutralize the biological function of bFGF. Experimental method 1. Cultured rat aortic vascular smooth muscle cells The cells were cultured in 37 鈩，

本文编号：1364655