兔AMSCs与BMSCs成骨分化比较及OGP对AMSCs成骨分化干预的实验研究

发布时间：2018-01-01 14:04

  本文关键词：兔AMSCs与BMSCs成骨分化比较及OGP对AMSCs成骨分化干预的实验研究　出处：《昆明医学院》2009年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】： 第一部分兔脂肪间充质干细胞与兔骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化对比实验研究 【目的】分离兔骨髓间充质干细胞和脂肪间充质干细胞,比较两种细胞的体外增殖及成骨分化能力,为脂肪间充质干细胞替代骨髓间充质干细胞做为骨组织工程种子细胞提供依据。 【方法】无菌条件下切取兔双侧腹股沟脂肪垫和抽取髂骨骨髓,利用细胞贴壁性对骨髓间充质干细胞和脂肪间充质干细胞进行分离,比较两种细胞的情况,包括(1)细胞形态、(2)细胞贴壁率、(3)细胞生长动力学、(4)细胞表面标记、(5)碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Von kossa染色鉴定向成骨方向分化的能力(6)碱性磷酸酶及游离钙含量定量测定。并对数据进行统计学分析。 【结果】(1)两种细胞形态均为条索样,呈成纤维细胞样形态。(2)对两种细胞贴壁率进行重复测量方差分析,F=2.905,P＞0.05,无显著统计学差异,即可以认为不同时间点两种细胞贴壁率相似。(3)脂肪间充质干细胞的增殖能力与骨髓间充质干细胞相当,消化后的第2、5代细胞经历24-48小时的潜伏期后,进入6-9天的对数生长期,然后过渡到平台期。(4)通过免疫细胞化学检测显示,骨髓间充质干细胞和脂肪间充质干细胞表面均阳性表达CD44。(5)两种细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、Von kossa染色均为阳性。(6)两种细胞成骨诱导后碱性磷酸酶定量测定,对于两组不同来源的细胞诱导后的ALP值进行重复测量方差分析,F=3.067,P＞0.05,无统计学差异,即可认为不同时间点两种细胞ALP值相当。(7)游离钙含量测定,对于两组不同来源的细胞诱导后的钙含量进行重复测量方差分析,F=7.564,P＞0.05,无统计学差异,即可认为不同时间点两种细胞ALP值相当。 【结论】(1)自兔脂肪中可提取出与骨髓间充质干细胞生物学特性类似的脂肪间充质干细胞。(2)相同条件下脂肪间充质干细胞与骨髓间充质干细胞成骨能力无显著性差异。(3)脂肪间充质干细胞可以作为骨组织工程种子细胞。 第二部分OGP对兔脂肪间充质干细胞增殖与成骨分化干预的实验研究 【目的】观察成骨生长肽(OGP)对兔脂肪间充质干细胞增殖及成骨分化的影响。 【方法】贴壁法分离获得兔脂肪间充质干细胞,通过换液和传代纯化细胞。用传二代细胞做MTT试验,以此确定OGP对脂肪间充质干细胞增殖作用的最佳活性浓度。将传3代脂肪间充质干细胞以10~5/孔的密度接种于6孔板中,以确定促进AMSCs成骨分化最佳OGP活性浓度。以及最佳活性浓度OGP、10~(-8)mol/L地塞米松及二者联合应用时对AMSCs成骨分化比较。 【结果】当OGP浓度处于一定范围内(10~(-11)-10~(-7)mol/L)时能明显促进兔脂肪间充质干细胞的增殖活性,其最佳作用浓度为10~(-11)mol/L。不同浓度OGP对AMSCs成骨分化与对照组相比均具有明显促进作用(P＜0.05),且最佳浓度为10~(-9)mol/L(P＜0.05)。10~(-9)mol/LOGP与10~(-8)mol/L地塞米松具有相当的成骨效应(P＞0.05)。10~(-9)mol/LOGP与10~(-8)mol/L地塞米松联合应用具有正协同效应,高于其他组效应(P＜0.05)。 【结论】在兔脂肪间充质干细胞的体外培养中,OGP对脂肪干细胞的增殖及成骨分化有明显促进作用,说明OGP在骨组织工程中有广阔的应用前景。
[Abstract]:Comparative Experimental Study on the Proliferation of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells and Rabbit Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells and Osteogenic Differentiation of Rabbit Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells Objective To isolate the rabbit bone marrow mesenchymal stem cells ( MSCs ) and adipose - derived mesenchymal stem cells ( MSCs ) , compare the in vitro proliferation and osteogenic differentiation ability of the two kinds of cells , and provide the basis for the replacement of bone marrow mesenchymal stem cells ( MSCs ) as the seed cells of bone tissue engineering . Methods The bone marrow of rabbit ' s bilateral inguinal fat pad was cut off under aseptic conditions . The cells were isolated by cell adhesion , including ( 1 ) cell morphology , ( 2 ) cell adherent rate , ( 3 ) cell growth kinetics , ( 4 ) cell surface marker , ( 5 ) alkaline phosphatase ( ALP ) and Von kossa staining . ( 4 ) The ALP values of the two groups were similar . ( 4 ) The ALP values of the two groups were similar . ( 4 ) The ALP values of the bone marrow mesenchymal stem cells and the adipose - mesenchymal stem cells were measured after 24 - 48 hours . Conclusion : ( 1 ) There is no significant difference between fat - derived mesenchymal stem cells and bone marrow mesenchymal stem cells from rabbit fat . ( 3 ) Adipose mesenchymal stem cells can be used as seed cells of bone tissue engineering . Effect of the second part of OGP on the proliferation and osteogenic differentiation of rabbit adipose - derived mesenchymal stem cells Objective To observe the effect of bone growth peptide ( OGP ) on the proliferation and osteogenic differentiation of rabbit fat mesenchymal stem cells . The optimal concentration of OGP on the proliferation of adipose - derived mesenchymal stem cells was determined by MTT assay . RESULTS : When OGP concentration was within a certain range ( 10 ~ ( -11 ) -10 ~ ( -7 ) mol / L ) , the optimal concentration of OGP was 10 ~ ( -11 ) mol / L . The optimal concentration was 10 ~ ( -9 ) mol / L ( P < 0 . 05 ) . 10 ~ ( -9 ) mol / LOGP and 10 ~ ( -8 ) mol / L dexamethasone have positive synergistic effect , which is higher than that of other group ( P < 0.05 ) . Conclusion : In vitro culture of rabbit adipose - derived mesenchymal stem cells , OGP can promote the proliferation and osteogenic differentiation of adipose - derived stem cells , suggesting that OGP has a wide application prospect in bone tissue engineering .

【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R329

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本文编号：1364803