结核分枝杆菌早期分泌靶抗原和抗原85B融合蛋白的原核表达及其在血清学检测中的初步应用

发布时间：2018-01-01 17:43

  本文关键词：结核分枝杆菌早期分泌靶抗原和抗原85B融合蛋白的原核表达及其在血清学检测中的初步应用　出处：《中国病原生物学杂志》2015年05期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的原核表达结核分枝杆菌抗原早期分泌抗原靶6ku蛋白和抗原85B融合蛋白,建立融合抗原对结核病人快速诊断方法。方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中PCR扩增ag85B和Rv3875基因并构建表达载体pGEX4T-1上,转化BL21经IPTG诱导表达GST-85B-ESTA-6融合蛋白,对包涵体进行变性和透析复性后进行GST亲和层析纯化,纯化的可溶性目的蛋白用聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行鉴定;以融合蛋白为抗原,采用ELISA检测结核病人血清抗体。结果成功构建了结核分枝杆菌ag85B和Rv3875融合基因原核表达载体,转化大肠埃希菌BL21后经诱导产生了高水平的GST-85B-ESTA-6,该蛋白存在于菌体沉淀中,以包涵体形式居多。包涵体经变性、复性后用GST亲和层析纯化,纯化蛋白仍能与结核病患者血清反应,即可用于病人血清抗体检测。结论成功构建了pGEX4T-1-ag85B-Rv3875重组质粒,并诱导表达了含有GST-标签的ESAT-6-85B融合蛋白,为进一步研究结核菌的免疫机制奠定了基础。
[Abstract]:Objective To construct a prokaryotic expression vector of GST - 85B - ESTA - 6 fusion protein by PCR from Mycobacterium tuberculosis H37Rv genome and to construct the fusion protein of GST - 85B - ESTA - 6 .

【作者单位】： 河南省疾病预防控制中心;
【基金】：十二五科技重大专项(No.2014ZX10003002)
【分类号】：R392
【正文快照】： *?**?肺结核是由结核分枝杆菌感染引起的严重危害人类健康的疾病,我国结核病年发病人数约为130万,每年因结核病死亡人数达13万。人口流动、细菌耐多药和结核菌/艾滋病病毒双重感染是结核病防治工作所面临的新挑战[1]。目前卡介苗(BCG)是唯一可用的结核病疫苗,从1921年至今已有

【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：1365562