结核分枝杆菌27000抗原的克

发布时间：2018-01-02 01:23

  本文关键词：结核分枝杆菌27000抗原的克隆、表达　出处：《安徽理工大学》2008年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】： 目的克隆结核分枝杆菌(MTB)LprG基因,并在大肠杆菌中重组表达MTB27 000抗原,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础。 方法培养MTB菌株并提取其基因组DNA。采用聚合酶链反应(PCR)从MTB基因组中扩增出LprG基因,将目的片段纯化回收后,克隆到pEASYT1Simple载体中,转化入大肠杆菌E.coli DH5α中,取阳性重组质粒经限制性核酸内切酶EcoRⅠ、HindⅢ双酶切鉴定后再进行测序分析。用限制性核酸内切酶EcoRⅠ、HindⅢ从重组质粒pEASY T1Simple-LprG中切下LprG基因,并插入到经同样双酶切的表达载体pET28a(+)中,转化入大肠杆菌Ecoli DH5α中,提取质粒进行双酶切鉴定。将重组表达载体pET28a(+)-LprG转化入Ecoli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定及可溶性分析。 结果从MTB基因组中扩增出711bp的LprG基因。测序结果显示扩增产物与GenBank中MTB H37Rv LprG基因序列一致。重组表达载体pET28a(+)-LprG经双酶切后,得到目的基因大小相同的两个片段,表明重组表达载体构建成功。携带有pET28a(+)-LprG的大肠杆菌E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后,在27kDa处获得目的蛋白,Western-blot分析该蛋白为所表达的目的蛋白。可溶性分析该蛋白以可溶性和包涵体两种形式共同存在,但主要以可溶性形式为主。 结论成功地克隆出MTB LprG基因;构建了MTB 27 000抗原的重组表达载体pET28a(+)-LprG,并在大肠杆菌中获得了高效表达,为以后研究奠定了基础。
[Abstract]:Objective to clone the MTB27 gene of Mycobacterium tuberculosis and express MTB27 000 antigen in Escherichia coli, so as to lay a foundation for the further study of its value in the diagnosis of tuberculosis. Methods MTB strain was cultured and its genome DNA was extracted. The LprG gene was amplified from the MTB genome by polymerase chain reaction (PCR), and the target fragment was purified and recovered. The recombinant plasmid was cloned into E. coli DH5 伪 and transformed into E. coli DH5 伪. The recombinant plasmid was digested with restriction endonuclease (EcoR 鈪，

本文编号：1367074