T淋巴细胞活化相关的microRNA的筛

发布时间：2018-01-02 11:52

  本文关键词：T淋巴细胞活化相关的microRNA的筛选、靶分子的预测、构建和鉴定　出处：《细胞与分子免疫学杂志》2009年08期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的:筛选T细胞活化相关的microRNA并预测其靶分子,通过双荧光素酶实验鉴定这些microRNA的靶分子。方法:利用ExiqonmiRNA基因表达谱芯片,以活化的Jurkat细胞(用CD3抗体和CD28抗体双信号活化)为实验组,未活化Jurkat细胞为对照组,分析了二者miRNA表达谱的差异,找出表达水平显著改变的miRNA,并通过实时定量PCR的方法对芯片结果进行验证;构建miRNA的真核表达载体;利用生物信息学方法预测miRNA的靶分子,构建含靶分子3′UTR的荧光素酶报告基因质粒;分别将miRNA基因真核表达质粒与含有靶分子的荧光素酶报告基因质粒共转染HEK293细胞,进行荧光素酶实验来鉴定miRNA的靶分子。结果:ExiqonmiRNA基因表达谱芯片显示:Jurkat细胞活化后,miR-202*、miR-33b、miR-568和miR-576的表达明显下调;实时定量PCR验证结果与芯片结果一致;酶切鉴定与序列测定证实miR-568的真核表达载体构建成功;利用miRanda软件预测miR-568的靶分子,筛选出与T细胞活化密切相关的分子;双荧光素酶实验显示miR-568对NFAT5有比较明显的抑制作用。结论:T细胞活化后,miR-202*、miR-33b、miR-568和miR-576表达明显下调;NFAT5可能是miR-568作用的一个靶分子。
[Abstract]:Objective : To screen the expression profiles of miR - 202 * , miR - 33b , miR - 568 and miR - 576 by means of real - time quantitative PCR . The results showed that miR - 202 * , miR - 33b , miR - 568 and miR - 576 were significantly downregulated by using the miRanda software . Results : The expression profiles of miR - 202 * , miR - 33b , miR - 568 and miR - 576 were significantly downregulated by using miRanda software .

【作者单位】： 第四军医大学免疫学教研室;
【基金】：国家重点基础研究发展计划(973)资助项目(2004CB518805) 教育部“长江学者和创新团队发展计划”资助项目(IRT0459)
【分类号】：Q78
【正文快照】： microRNA简称miRNA,是一种21～25个碱基的非编码小分子RNA,它广泛存在于真核生物中。miRNA基因的初级转录产物(pri-miRNA)在细胞核中被RNaseⅢDrosha切割成为前体miRNA(pre-miRNA),pre-miRNA在转运蛋白5的作用下由核内转到胞质中,然后由另一种RNaseⅢDicer进一步切割产生成熟

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本文编号：1369091