H-2K~d-抗原肽复合物表面展示脂质体的制备及初步鉴定

发布时间：2018-01-04 07:15

  本文关键词：H-2K~d-抗原肽复合物表面展示脂质体的制备及初步鉴定　出处：《扬州大学》2008年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】： 本研究首先试图克隆、表达和纯化小鼠H-2K~d、β2m分子。利用RT-PCR技术从SP2/0细胞中扩增出H-2K~d胞外区全长cDNA,采用聚合酶链式反应扩增得到H-2K~d基因,并在H-2K~d的羧基末端选择性地加入6-his(组氨酸)的标签。成功构建重组质粒pET22b-H-2K~d。诱导表达的H-2K~d和β2m蛋白主要以包涵体形式存在,采用洗涤包涵体的方法纯化H-2K~d和β2m蛋白。然后在谷胱苷肽氧化还原系统中,利用稀释折叠复性的方法将蛋白H-2K~d、β2m和H-2K~d限制性的流感病毒九肽一起复性,再经过超滤浓缩和Sephacryl-300柱层析纯化,获得特异性的H-2K~d-抗原肽复合物。 以二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、胆固醇(CHOL)和镍金属螯合磷脂(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3- [N-(5-amino-1- carboxypentyl) iminodiacetic acid] succinyl , DOGS-NTA-Ni)为脂质材料,采用薄膜-超声分散法制备DOPC/DOGS-NTA-Ni脂质体,并利用激光动态光散射仪和透射电子显微镜分析脂质体的形态分布、粒径大小等特征。结果显示DOPC/DOGS-NTA-Ni脂质体平均粒径约为75nm,脂质体的表面形态圆整,光滑。 在上述工作的基础上,我们将H-2K~d-抗原肽复合物和DOPC/DOGS-NTA-Ni脂质体按浓度比2∶1等体积混合,4℃条件下孵育过夜,期望把羧基末端含有6-his-tag的H-2K~d-抗原肽复合物展示在脂质体的表面。激光动态光散射仪发现H-2K~d-抗原肽复合物表面展示后脂质体的粒径比空白脂质体的粒径增大,平均粒径约为94 nm。透射电镜观察结果显示H-2K~d-抗原肽复合物能够展示在DOPC/DOGS-NTA-Ni脂质体表面。 本实验研究成功地将H-2K~d-抗原肽复合物展示在脂质体表面,为进一步构建以脂质体为载体的小鼠人工抗原递呈细胞的研究奠定了物质基础。
[Abstract]:The H - 2K ~ d and 尾2m proteins were amplified from SP2 / 0 cells by RT - PCR . The H - 2K ~ d and 尾2m proteins were amplified by polymerase chain reaction . The H - 2K ~ d and 尾2m proteins were purified by polymerase chain reaction . DOPC / DOGS - Ni liposome was prepared by a thin film - ultrasonic dispersion method . The results showed that the average particle size of DOPC / DOGS - Ni liposome was about 75nm , and the surface morphology of the liposome was smooth and smooth . On the basis of the above work , H - 2K ~ d - antigen peptide complexes and DOPC / DOGS - Ni liposome were mixed at a concentration ratio of 2 : 1 . The complexes of H - 2K ~ d - antigen peptide with 6 - his - tag were displayed on the surface of liposomes at 4 鈩，

本文编号：1377588