肠道病毒71型H6株在Vero细胞上的传代适应

发布时间：2018-01-04 12:17

本文关键词：肠道病毒71型H6株在Vero细胞上的传代适应　出处：《河南师范大学》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：肠道病毒71型(EV71)感染可引起手足口病、疱疹性咽峡炎、无菌性脑膜炎、脊髓灰质炎样麻痹、脑干脑炎、肺水肿等多种疾病。近年来,引起严重神经系统疾病的EV71大爆发在亚太地区频繁出现,包括1997年的马来西亚、1999年的澳大利亚、2000年的新加坡、1997年和2000年的日本,1998年的中国台湾,及2008年和2009年的中国大陆等。在过去的10年里,由EV71引起的神经系统综合症不断增多。随着EV71在全世界范围的蔓延,如何有效治疗和控制该病毒的传播一直是人们关注的焦点。由于目前尚无针对EV71的特效药和疫苗,因此,研发一种能有效控制EV71流行的疫苗已势在必行。本课题研究了EV71 H6株在Vero细胞中的传代适应,为以后制备疫苗提供大量抗原。本课题以EV71 H6株病毒为研究材料,建立其在Vero细胞上的适应株。首先将EV71 H6株病毒在RD细胞上进行分离,并在Vero细胞上通过蚀斑筛选和适应性传代,然后开展生物学、免疫学及理化学特性的研究。用常规方法处理来自临床确诊为手足口病患儿的粪便标本。将标本接种于RD细胞,盲传3代后即可出现明显的细胞病变,然后在Vero细胞上进行蚀斑筛选和连续传代培养。结果显示,各代病毒蚀斑直径大小没有变化,传至第5代时,CPE明显增多,病毒滴度从4.75 LogCCID50/ml提高到8.13 LogCCID50/ml,继续传代,病毒滴度稳定在8.00 LogCCID50/ml以上。EV71 H6株病毒的最佳培养条件试验表明,制备毒种的适宜MOI为0.01;在96小时左右收获的病毒滴度最高;在-80℃环境下能够稳定保存。理化学研究试验结果表明,EV71核酸类型为RNA,不具有耐热性,但可耐受乙醚、酸的作用。经传代后的稳定性试验研究表明,EV71 H6适应株可被特异抗EV71血清中和,证明该病毒确为EV71型。用EV71 H6适应株病毒免疫家兔,以RD细胞为基质进行中和试验,其免疫原性研究结果显示,中和抗体效价有了逐步提高,最高可达1:1024,显示了良好的免疫原性。初步试验结果表明,EV71 H6株在Vero细胞中能进行适应性传代,并保持稳定的生物学性状。该结果为EV71疫苗的进一步研究提供了很有价值的参考数据。
[Abstract]:Enterovirus 71 ( EV71 ) infection can cause a variety of diseases such as hand - foot oral disease , herpes angina , aseptic meningitis , poliomyelitis - like paralysis , encephalitis , pulmonary edema , etc . In recent years , EV71 caused by severe nervous system diseases has been increasing frequently in the Asia - Pacific region . In this study , the EV71 H6 strain was used as the research material to establish its adaptive strain on Vero cells . The EV71 H6 strain was first isolated on RD cells , and the Vero cells were screened by plaque screening and adaptive passage . Then , the biological , immunological and chemical properties of EV71 H6 strain were studied . The results showed that EV71 H6 strain could be used as an EV71 type . The results showed that EV71 H6 strain could be used as an EV71 type . The results showed that EV71 H6 strain could be used as an EV71 type . The results showed that EV71 H6 strain could be used as substrate for neutralization test . The results showed that EV71 H6 strain can be used in Vero cells for adaptive passage and stable biological characters . The results provide valuable reference data for further research of EV71 vaccine .

【学位授予单位】：河南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R346

【参考文献】