CT联合ESA鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染保护性免疫应答

发布时间：2018-01-04 17:38

  本文关键词：CT联合ESA鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染保护性免疫应答　出处：《山西医科大学》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】： 目的观察霍乱毒素(cholera toxin, CT)联合弓形虫排泄-分泌抗原(excreted-secreted antigens, ESA)滴鼻免疫小鼠的黏膜佐剂的适宜剂量以及鼻内免疫小鼠诱导的黏膜及系统免疫应答,确定其抗弓形虫感染的作用。为弓形虫黏膜疫苗研制提供实验基础。 方法分三部分：第一部分观察不同剂量CT联合ESA滴鼻免疫小鼠的黏膜佐剂效应。5-6周龄BALB/c小鼠60只随机分为5组,每组12只,分别以O、0.5、1.0、1.5或2.0μg CT联合ESA 20μg滴鼻免疫小鼠,间隔2周免疫2次。末次免疫后30d,观察小鼠的健康状况、存活率。眼静脉丛采血后颈椎脱臼处死全部小鼠,分离脾、Peyer's patch (PP)、肠系膜淋巴结(MLN)计数淋巴细胞。用ELISA法检测血清IgG和粪便slgA水平。 第二部分：观察CT联合ESA鼻内免疫小鼠诱导黏膜免疫及系统免疫应答的效果。5-6周龄BALB/c小鼠48只随机分为3组,每组16只。分别用PBS 20μl、ESA 20μg或CT 1.0μg+ESA 20μg／只滴鼻免疫小鼠2次,间隔2周。末次免疫后14d,颈椎脱臼处死小鼠,ELISA测定粪便和鼻咽冲洗液slgA抗体水平；计数PP、肠上皮淋巴细胞(IEL)、鼻相关淋巴组织(NALT)、鼻通道(NC)淋巴细胞数,免疫细胞化学法检测CD4+、CD8+T细胞亚群水平。 第三部分：观察CT联合ESA鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染作用。6周龄BALB/c小鼠60只,随机分为3组,每组20只。分别用PBS 20μl、ESA 20μg或CT 1.0μg+ESA20μg／只滴鼻免疫2次,间隔2周。末次免疫后14d,用4×104个弓形虫速殖子／只灌胃攻击所有小鼠,观察小鼠健康及死亡情况。速殖子攻击后30d,全部小鼠被摘眼球采血后处死,ELISA法检测血清IgG和粪便slgA,计数肝、脑组织内弓形虫速殖子,分离并计数PP和脾淋巴细胞数。 结果CT联合ESA鼻内免疫小鼠诱导了MLN、PP和脾淋巴细胞高水平免疫应答,并均呈现一定的剂量效应,显著高于无佐剂组(P0.05),但较高剂量组(1.0μg、1.5μg和2.0μg)之间无显著差异(P0.05)。1.0μg CT联合ESA鼻内免疫小鼠既诱导了较高的黏膜和系统免疫应答,又对小鼠的健康没有不良影响,为适宜剂量。 CT佐剂联合ESA滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导GALT和NALT黏膜部位免疫应答。CT佐剂组小鼠鼻咽冲洗液和粪便slgA水平均显著高于ESA组和PBS组(P0.01),CT佐剂组粪便slgA水平也显著高于ESA组(P0.01)。CT佐剂组和ESA组小鼠GALT部位的PP淋巴细胞增生显著(P0.01),主要以CD4+T细胞为主；而IEL以CD8+T细胞增生为主(P0.01),CD4+/CD8+比值降低(P0.05)。CT佐剂组NALT内淋巴细胞明显增生(P0.01),其中CD4+、CD8+T细胞均有增生(P0.01),CD4+/CD8+比值降低(P0.05)。CT佐剂组NC中淋巴细胞数明显升高(P0.01),以CD4+T细胞为主(P0.01)。 CT作为佐剂联合ESA滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答可有效抵抗弓形虫速殖子攻击。CT作为佐剂联合ESA滴鼻免疫小鼠的健康状况明显好于PBS组和ESA组,存活率(95%)也显著高于PBS组(55%)。与PBS组相比,CT+ESA组肝和脑组织内速殖子数分别减少了80.19%(P0.001)和78.24%(P0.005)。 结论CT具有显著的佐剂效应,CT作为佐剂联合ESA滴鼻免疫小鼠可诱导黏膜及系统免疫应答并有效抵抗弓形虫速殖子攻击,对小鼠弓形虫感染具有保护作用。
[Abstract]:Objective To observe the effects of cholera toxin ( CT ) combined with Toxoplasma gondii ( ESA ) on mucosal adjuvant and mucosal immune responses induced by intranasal immunization in mice . Methods 60 BALB / c mice were divided into 5 groups randomly divided into 5 groups , 12 in each group , 0 . 5 , 1.0 , 1.5 or 2.0 渭g CT combined with ESA 20 渭g . After the last immunization for 30 days , the health status and survival rate of mice were observed . In the second part , the effects of CT combined with ESA on mucosal immunity and systemic immune responses were observed . BALB / c mice were randomly divided into 3 groups ( 20 渭l , ESA 20 渭g or CT 1.0 渭g + ESA 20 渭g / L ) for 2 weeks . In the third part , 60 BALB / c mice with 6 - week - old BALB / c mice were randomly divided into three groups : 20 渭l PBS , 20 渭g or CT 1.0 渭g + ESA20 渭g / L . All the mice were sacrificed for 2 weeks . After the last immunization , all the mice were sacrificed and killed with 4 脳 104 Toxoplasma gondii tachyzoites / rats . Results The high level immune responses of MLN , PP and splenic lymphocytes were induced by CT combined ESA intranasal immunization , and there was no significant difference ( P0.05 ) between the higher dose group ( 1.0 渭g , 1.5 渭g and 2.0 渭g ) ( P0.05 ) .



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本文编号：1379444