日本血吸虫感染小鼠体内IL-17、IL-23的动态变化研究

发布时间：2018-01-06 23:31

本文关键词：日本血吸虫感染小鼠体内IL-17、IL-23的动态变化研究　出处：《华中科技大学》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：在人类的寄生虫病中,血吸虫病是严重影响社会经济和公共健康的一种全球性疾病,其危害性仅次于疟疾。血吸虫病在约76个国家或地区流行,主要分布在亚洲、非洲与拉丁美洲。对人体危害较大的血吸虫有3种,即日本血吸虫、埃及血吸虫、曼氏血吸虫。其中,在我国流行的是日本血吸虫,其感染人数超过76万,尤其在农村和城郊地区,由于人群卫生知识缺乏及基本卫生设施达不到卫生要求,而使该地区人群处于高感染风险中。疫苗是控制与根除血吸虫病的重要手段之一。血吸虫病的疫苗研究已逾半个世纪,目前世界上公认为有发展前途的疫苗候选抗原有6种,即血吸虫97kD的副肌球蛋白、谷胱苷肽S转移酶、Sm37甘油磷酸脱氢酶、Sm14脂肪酸结合蛋白、磷酸丙糖异构酶、照射疫苗,但这些疫苗效果不是很理想,离实际应用尚有一定的距离,因此还需进一步研究血吸虫与宿主的相互关系,研究其免疫效应机制。众所周知,有效的免疫均会产生抗原特异性的CD4+ T细胞反应,其在宿主防御方面发挥重要作用。最近研究发现了一种新的CD4+ T细胞亚群—Th17,其命名同Th1与Th2一样,是一种功能性的分类方法,主要是基于其分泌细胞因子的不同而命名,分化成熟的Thl7可以分泌IL-17A,IL-17F,IL-21,IL -22等多种细胞因子,其中IL-17A在宿主防御与自身免疫性疾病中具有重要的调节作用。研究还发现,孤儿核受体(Orphan nuclear receptor,RORγt)是控制Thl7细胞分化的特征性转录因子。在初始CD4+ T细胞向Th17细胞的分化中,TGF-β与IL-6首先启动该过程,随后产生的Th17细胞自分泌产生IL-21扩大分化规模,进一步活化STAT3,诱导RORγt表达;而IL-23是维持Th17存活的重要因子,缺少IL-23不影响Th17的产生,但Th17不能扩增和存活。Th17是感染性炎症必需的效应细胞,研究发现,多种微生物早期均可诱导表达IL-17,IL-17与其受体结合后即可诱导这些受体细胞(如粒细胞、上皮细胞及成纤维细胞)表达趋化因子与细胞因子,从而诱导中性粒细胞的产生、活化并将其招募至感染部位,参与机体的防御作用。除此外,IL-17的产生还能诱导Th1和TDTH的分化,诱导Th1型炎症反应。IL-23/IL-17细胞因子轴越来越成为当前研究的热点问题,基于以上方面的研究,我们认为L-23/IL-17细胞因子轴与日本血吸虫感染也存在某些方面的联系。本实验拟通过检测日本血吸虫自然感染小鼠模型中IL-17和IL-23的动态表达来探讨L-23/IL-17细胞因子轴在日本血吸虫病发病中的可能作用。 BALB/c鼠经皮感染25条日本血吸虫尾蚴,在感染后不同时间点(1、2、4、6、8、10周)剖杀,无菌取脾,分离脾脏组织及脾细胞培养上清液,并经心脏灌注收集成虫。用双抗体夹心ELISA和RT-PCR检测正常对照组(0周处理组)与感染组中IL-17A与IL-23p19在蛋白水平与mRNA水平的表达。 ELISA结果显示,血吸虫感染后,脾细胞培养上清液中IL-17A蛋白分泌水平明显升高,且在感染后的第1周检测到急剧升高的IL-17A,此后逐渐下降,至感染后第4周恢复至正常水平,第8周时其表达水平低于正常值;感染后小鼠体内IL-23p19的表达水平也逐步升高,并于感染后第2周到达高峰,感染后第4周开始逐渐下降,到第8周末IL-23p19的表达低于正常值。 RT-PCR显示,正常对照组与感染后6个时间点剖杀的小鼠体内均检测到IL-17A和IL-23p19 mRNA的表达,且感染与正常对照组相比,两种细胞因子mRNA表达水平均有一定程度的上升。感染1周后IL-17A mRNA的表达水平急剧升高,其结果与蛋白的表达是一致的。且研究中我们还发现,在日本血吸虫自然感染小鼠模型中IL-17A和IL-23p19 mRNA的变化趋势中还存在着正相关(P0.01)。本研究通过对日本血吸虫自然感染模型体内IL-17A与IL-23p19的动态变化的观察,发现:IL-23p19、IL-17A在血吸虫感染小鼠体内协同表达,并于感染早期呈现显著上升趋势,提示IL-17A、IL-23p19可能参与了血吸虫感染早期的免疫病理过程。
[Abstract]:In the parasitic diseases of humans , schistosomiasis is a global disease which has a serious impact on socio - economic and public health , and its harmfulness is second only to malaria . There are three species of Schistosoma japonicum in Asia , Africa and Latin America . The vaccine is one of the important methods to control and eradicate schistosomiasis . The vaccine research for schistosomiasis has been more than half a century . There are six kinds of vaccine candidate antigens in the world , namely , the 97 kD paramyosin , glutathione S transferase , Sm37 glycerol phosphate dehydrogenase , Sm14 fatty acid binding protein , phosphotriose isomerase and irradiation vaccine . However , these vaccine effects are not ideal , and the mechanism of immune effector is studied . It is well known that effective immunization can produce antigen - specific CD4 + T cell response , which plays an important role in host defense . In this study , it was found that the expression of IL - 17 and IL - 17 could induce the differentiation of Th1 and TDTH and induce Th1 - type inflammatory response . The expression of IL - 17A and IL - 23p19 at different time points ( 1 , 2 , 4 , 6 , 8 , 10 weeks ) in BALB / c mice infected with Schistosoma japonicum was detected by double - antibody sandwich ELISA and RT - PCR . ELISA results showed that IL - 17A secretion levels in the supernatant of spleen cells increased significantly after infection , and the level of IL - 23p19 increased gradually after infection at Week 1 , and the level of IL - 23p19 increased gradually after infection . The level of IL - 23p19 increased gradually in the second week after infection . RT - PCR showed that IL - 17A and IL - 23p19 mRNA were detected in normal control group and 6 time points after infection , and the levels of IL - 17A and IL - 23p19 mRNA were increased in the normal control group . In this study , the dynamic changes of IL - 17A and IL - 23p19 in mice infected with Schistosoma japonicum were observed . It was found that IL - 23p19 and IL - 17A were co - expressed in mice infected with Schistosoma japonicum .

【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R392

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