DC-SIGN表达调控与抗结核免疫应答关系的实验研究

发布时间：2018-01-08 16:01

  本文关键词：DC-SIGN表达调控与抗结核免疫应答关系的实验研究　出处：《重庆医科大学》2009年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】： 目的:筛选合适的实验对象,研究IL-4调控树突状细胞特异性细胞间黏附分子3结合非整合素(dendritic cell-specific ICAM-3 grabbing nonintegrin, DC-SIGN)的表达对树突状细胞免疫学功能的影响,进而探讨DC-SIGN表达水平与结核病发生的关系。 方法:①密度梯度离心法获得C57BL/6小鼠骨髓、脾脏和人外周血单个核细胞,贴壁法去除悬浮细胞,贴壁细胞中加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)协同诱导其分化为树突状细胞。倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表面CD11c、DC-SIGN、CD80、CD83、CD86和MHC-Ⅱ(或HLA-DR)分子的表达。②用不同剂量的IL-4(5、10、50、100、200 ng/ml)调控人外周血来源的DCs表面DC-SIGN的表达水平,流式细胞仪检测各组DCs表型。③根据加入IL-4剂量将人外周血来源的DCs分为IL-4(5 ng/ml)组和IL-4(50 ng/ml)组,分别加入脂多糖(LPS)、结核杆菌H37Rv菌悬液共培养。应用流式细胞仪检测各组DCs表型(CD11c、DC-SIGN、CD83、CD86、HLA-DR),ELISA法检测细胞培养液中IL-12、IL-10含量,混合淋巴细胞培养法检测各组DCs刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。 结果:①小鼠骨髓、脾脏及人外周血来源的DCs培养7天后具有DCs的典型形态学特征。②小鼠骨髓、脾脏来源的DCs培养1天、3天、7天后,DC-SIGN表达水平均 2%。人外周血来源的DCs培养1天、3天、7天后DC-SIGN表达水平分别为:52.86%、87.70%、83.37%。③小鼠骨髓来源的DCs培养7天后细胞表面CD11c、CD80、CD86和MHC-Ⅱ表达水平分别为:5.42%、2.95%、29.19%、52.59%。小鼠脾脏来源的DCs培养7天后细胞表面CD11c、CD80、CD86和MHC-Ⅱ分子表达水平分别为:4.01%、1.19%、16.16%、54.89%。人外周血来源的DCs培养7天后细胞表面CD11c、CD83、CD86和HLA-DR表达水平分别为:93.62%、90.06%、97.54%、99.65%。④当加入IL-4的剂量由5 ng/ml增加到50 ng/ml时,DC-SIGN的表达水平显著增加(P 0.05)。但当IL-4的剂量由50 ng/ml增至200 ng/ml时,DC-SIGN的表达水平虽仍随IL-4剂量增加而增加,但差异无统计学意义(P 0.05)。⑤表达不同水平DC-SIGN的DCs成熟度无显著差异(P 0.05)。⑥表达不同水平DC-SIGN的DCs加入LPS、H_(37)Rv诱导后,培养液中IL-12含量无显著差异(P 0.05),加入LPS诱导后培养液中IL-10含量也无显著差异(P 0.05),但DC-SIGN~(high)-DCs加入H37Rv诱导后培养液中IL-10含量明显高于DC-SIGN~(low)-DCs(P 0.05)。⑦表达不同水平DC-SIGN的DCs加入LPS诱导后刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力差异无统计学意义(P 0.05)。DC-SIGNhigh-DCs加入H37Rv诱导成熟后与表达不同水平DC-SIGN的DCs加入LPS诱导成熟后刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力相当(P 0.05),但DC-SIGN~(low)-DCs加入H37Rv诱导后刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力明显低于其它3组(P 0.05)。 结论:①小鼠骨髓和脾脏来源的DCs体外培养后细胞表面DC-SIGN及共刺激分子表达水平低,且细胞纯度低,无法进行后续实验,C57BL/6小鼠不适合用于建立研究DC-SIGN的动物模型。人外周血来源的DCs体外培养后细胞表面DC-SIGN及共刺激分子表达水平高,且细胞纯度高,适合进行后续实验。②IL-4能调控DC-SIGN的表达水平,并呈剂量依赖性。③DC-SIGN~(high)-DCs加入H37Rv诱导后分泌IL-10水平明显高于DC-SIGN~(low)-DCs,但DC-SIGN~(low)-DCs加入H_(37)Rv诱导后刺激T淋巴细胞增殖的能力明显降低。DC-SIGN表达水平过高或过低均不利于机体抗结核免疫应答。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of IL - 4 on the immunological function of dendritic cells in vitro and to explore the relationship between DC - SIGN expression level and tuberculosis . Methods : 鈶，

本文编号：1397749