新型穿膜肽介导p53融合蛋白的表达及其免疫原性分析

发布时间：2018-01-10 06:02

  本文关键词：新型穿膜肽介导p53融合蛋白的表达及其免疫原性分析　出处：《西南大学学报(自然科学版)》2015年02期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的:原核表达新型细胞穿膜肽RDP介导p53融合蛋白,并检测其免疫原性的强弱.方法:以质粒pET28ap53为模板扩增p53基因,并克隆至原核表达载体pET28a-RDP中,构建重组表达质粒pET28a-RDP-p53,转化至大肠杆菌Rosetta,IPTG诱导表达蛋白并纯化,SDS-PAGE确定该蛋白准确性.同时,将昆明小鼠分为空白对照组(等容生理盐水)和RDP-p53融合蛋白高、中、低剂量(4mg/kg,2mg/kg,1mg/kg)组,经腹腔注射免疫,每隔2d给药1次,30d后眼球取血,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中IgG的含量.结果:双酶切及测序结果显示,p53基因已克隆入表达载体中;RDP-p53融合蛋白在上清和沉淀中均获得表达.ELISA测定结果表明,与对照组比较,低、中剂量组小鼠血清中IgG含量没有明显升高(p0.05),高剂量组显著升高(p0.05).结论:成功表达并纯化RDP-p53融合蛋白,其免疫原性较弱且与给药剂量相关,为进一步研究RDP-p53融合蛋白对脑肿瘤的药理作用奠定基础.
[Abstract]:Objective: to express p53 fusion protein mediated by transmembrane peptide (RDP) in prokaryotic cells and to detect its immunogenicity. Methods: p53 gene was amplified by plasmid pET28ap53. The recombinant expression plasmid pET28a-RDP-p53 was constructed and transformed into Escherichia coli Rosetta. IPTG induced expression of the protein and purified SDS-PAGE to determine the accuracy of the protein. At the same time, Kunming mice were divided into blank control group (isovolumic saline) and RDP-p53 fusion protein high, medium. In the low dose group (4 mg / kg ~ 2 mg 路kg ~ (-1) mg 路kg ~ (-1)), the rats were immunized by intraperitoneal injection, and blood was taken from the eyeball every 2 days after 30 days. The IgG content in serum was determined by Elisa. Results: the results of double enzyme digestion and sequencing showed that the p53 gene had been cloned into the expression vector. The expression of RDP-p53 fusion protein in supernatant and precipitate was determined by Elisa. The results showed that the expression of RDP-p53 fusion protein was lower than that of control group. The content of IgG in serum of middle dose group was not significantly increased, while that of high dose group was significantly higher than that of high dose group. Conclusion: RDP-p53 fusion protein was successfully expressed and purified. The immunogenicity of RDP-p53 fusion protein was weak and related to the dosage of the drug, which laid a foundation for further study of the pharmacological effect of RDP-p53 fusion protein on brain tumors.
【作者单位】： 西南大学药学院;
【基金】：国家自然科学基金(81273416) 国家大学生创新实验计划(201210635075)
【分类号】：R392
【正文快照】： p53作为重要的肿瘤抑制基因,一直备受研究者的青睐[1].当细胞DNA受到损伤时,p53蛋白可诱导细胞周期阻滞,并及时修复DNA损伤;当DNA损伤无法修复时,p53蛋白还可诱导细胞凋亡,防止细胞的恶性转化,从而抑制肿瘤的发生[2].文献报道野生型p53蛋白功能的缺失将会导致肿瘤的发生[3],所

【参考文献】

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3 吕秋军;;生物技术药物免疫原性的评价及面临的挑战[J];中国新药杂志;2007年03期

【共引文献】

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2 通讯员 沈季 记者 张兆军;抗肿瘤融合蛋白进入临床试验[N];科技日报;2005年

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本文编号：1404103