LAMP快速检测日本血吸虫感染性钉螺、卡氏肺孢子虫及恶性疟原虫的研究

发布时间：2018-01-11 07:13

  本文关键词：LAMP快速检测日本血吸虫感染性钉螺、卡氏肺孢子虫及恶性疟原虫的研究　出处：《南华大学》2009年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification.LAMP)快速检测日本血吸虫( Schistosoma japonicum)感染性钉螺、卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)的研究。 方法以日本血吸虫、卡氏肺孢子虫、恶性疟原虫的特异基因为靶序列,利用PrimerExplorer V3软件分别设计扩增靶基因的4条LAMP引物,酚氯仿法分别提取三种病原体的DNA,取适量模板DNA加入配制并优化好的LAMP反应体系,65℃下60 min,完成对靶病原体基因的扩增,通过肉眼观察、SYBR Green I染色及电泳来判定扩增结果。LAMP扩增产物经酶切进一步鉴定;设立对照组评价特异性;10倍系列稀释模板检测LAMP敏感性。 结果模板经LAMP扩增后,肉眼、SYBR Green I染色和电泳均能观察到LAMP扩增产物的出现,电泳后呈LAMP特征性梯状条带,对照组均无扩增产物;三种病原体LAMP扩增产物经相应限制性内切酶酶切鉴定正确;结果显示三种病原体LAMP检测方法特异;LAMP可检测到日本血吸虫、卡氏肺孢子虫、恶性疟原虫的敏感性分别是1pgDNA/μL,1pgDNA/μl,1.5个疟原虫/107RBC ,高于或与PCR敏感性相当。 结论建立了日本血吸虫、卡氏肺孢子虫、恶性疟原虫特异、敏感和快速的LAMP检测方法。
[Abstract]:Objective to detect Schistosoma japonicum (Schistosoma japonicum) by loop-mediated isothermal amplification. Schistosoma japonicum infected Oncomelania hupensis. Pneumocystis carinii, Plasmodium falciparum. Methods the specific bases of Schistosoma japonicum, Pneumocystis carinii and Plasmodium falciparum were used as target sequences. Four LAMP primers were designed to amplify the target gene by PrimerExplorer V3 software, and the DNA of three pathogens were extracted by phenol chloroform method. Appropriate amount of template DNA was added to the prepared and optimized LAMP reaction system for 60 min at 65 鈩，

本文编号：1408583