异源反应性NK细胞对输血相关免疫抑制作用的初步研究

发布时间：2018-01-11 16:23

本文关键词：异源反应性NK细胞对输血相关免疫抑制作用的初步研究　出处：《中国人民解放军军事医学科学院》2009年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的意义:同种异基因的血液输注会导致受血者免疫状态发生改变,这在临床输血学文献资料中被称为输血相关性免疫调节(transfusion-associated immunomodulation, TRIM)。在输血相关的免疫调节中,自然杀伤(Natural killer, NK)细胞是重要的一环。位于NK细胞表面的杀伤细胞免疫球蛋白样受体(Killer cell immunoglobulin-like receptor, KIR)能够特异性识别并结合靶细胞表面的HLA-Ⅰ类分子,传导抑制或激活信号,如同一套有效的开关系统,调节NK细胞的杀伤功能,在抗感染、抗肿瘤等方面发挥至关重要的作用。KIR分为抑制型(DL)和活化型(DS)两组,每一组均有其特定的细胞外结构域,且均与特定的配体结合,分别介导抑制性或活化性反应。KIR特异性识别不同的HLA分子,KIR2DLl/2DS1识别HLA-Cw2、Cw4、Cw5、Cw6、Cw15,其共同特点是HLA第80位氨基酸残基为赖氨酸;KIR2DL2、2DL3/2DS2、2DS3识别HLA-Cw1、Cw3、Cw7、Cw8、Cw12、Cw14,其共同特点是HLA第80位氨基酸残基为天门冬氨酸;KIR3DL1识别HLA-Bw4,3DL2识别HLA-A3/-A11;2DL4识别HLA-G;其余的KIR配体尚未明确。当KIR不能识别来自不同个体的HLA-I类分子时就会产生异源反应性,反之当KIR能够识别来自不同个体的HLA-I类分子时就会产生免疫耐受。目前大部分研究都是从NK细胞的数量和活性方面的变化入手,异体输血引起NK细胞数量和活性被动地降低,对于主动发挥NK细胞的作用方面没有涉及。异源反应性NK细胞(Alloreactive natural killer cell)概念的出现,为输血相关免疫抑制的预防和逆转提供了新的思路。截止目前,NK细胞的异源性反应在TRIM中的作用研究尚无文献报道。借鉴NK细胞在造血干细胞移植中应用的研究经验,我们提出这样的设想:像交叉配血一样,在输血前做KIR和HLA -I类分子配型,选择与受血者HLA- I类分子不匹配KIR的供血者,产生NK细胞的异源性反应,预防或逆转免疫抑制状态,用于肿瘤、血液病和移植病人的常规输血和个体化输血治疗。本实验模拟临床输血,旨在探讨当供血者的KIR与受血者HLA- I类分子不同程度匹配情况下,异源性反应NK细胞对输血相关免疫抑制的作用。材料和方法:采用miniMACS免疫磁珠分选方法,从外周血单个核细胞(PBMC)中得到纯化的NK细胞,随后在特定的条件下进行体外培养,并采用PCR-SSP法对此外周血进行5种KIR抑制基因的分型。将已经KIR分型的NK细胞与已知HLA分型的血液病病人骨髓移植供者的全血按一定比例(相当于60公斤体重个体输入800ml全血)混合,分不同时间点取样检测不同免疫指标的变化。实验共20组,根据KIR和HLA的不相合程度进行分析,比较不同相合程度对血液免疫功能的影响。结果:经免疫磁珠分离方法可以得到较高纯度的NK细胞,由分离前的13.8±2.24%提高到分离后的94.5±2.61%,细胞存活率平均值95%。培养21d,细胞增殖最多扩增了13倍,第7-15d细胞增殖速度较快,在培养第14d效靶比为10:1时杀伤活性最高,能达到94%。通过对不同KIR和HLA的不相合组免疫指标的分析发现:从0h到24h,IL-2、IL-4、PGE2、TNF-α、TNF-β、IFN-γ、GM-CSF的浓度都随时间的增加而增加(P0.05),IgA、IgM、IgG的浓度都随时间的增加而减少(P0.05);KIR与HLA不相合程度的不同与IL-2、IL-4、PGE2、IgA、IgM、IgG浓度无关(P0.05),TNF-α、TNF-β、IFN-γ、GM-CSF的浓度随着KIR与HLA不相合程度的加大而增加(P0.05)。结论:KIR与HLA不相合程度越高越能激发异源反应性NK细胞的免疫功能,这将能更好的逆转输血相关免疫抑制作用。
[Abstract]:Objective : Blood infusion of allogene can cause changes in immune status of recipients , which is called transfusion - associated immunomodulation ( TRIM ) in clinical transfusion literature . KIR3DL1 recognizes HLA - Cw2 , Cw4 , Cw7 , Cw8 , Cw12 , Cw14 . Materials and Methods : The purified NK cells were isolated from peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) by miniMACS immunomagnetic bead sorting method . Results : NK cells with higher purity were obtained by immunomagnetic bead separation method . The results showed that the concentration of IL - 2 , IL - 4 , PGE2 , TNF - 伪 , TNF - 尾 , IFN - 纬 and GM - CSF increased with the increase of time ( P0.05 ) . Conclusion : The higher the level of KIR and HLA , the higher the immune function of NK cells can be activated .

【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R392

【参考文献】