编码流感病毒核蛋白和基质蛋白DNA疫苗的免疫保护作用研究
发布时间：2018-01-15 07:13
本文关键词：编码流感病毒核蛋白和基质蛋白DNA疫苗的免疫保护作用研究 出处：《湖南师范大学》2008年硕士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】： DNA疫苗是最近几年从基因治疗研究领域发展起来的一种新型疫苗,它能诱导机体产生持久的体液免疫和细胞免疫应答,具有预防和治疗疾病的作用。 流感病毒的核蛋白(nucleoprotein,NP)和基质蛋白(matrix proteinM)具有型特异性,根据NP和M的不同,可以将流感病毒分为A、B、C三型,且它们的核苷酸序列非常保守。本实验将A型流感病毒A/PR/8/34(PR8)(H1N1)的流感病毒核蛋白基因(NP)和基质蛋白基因(M)克隆入真核表达载体中,构建的DNA疫苗用小鼠模型来评估NP和M DNA疫苗的免疫保护作用,期望能在预防流感上取得一些成果。 实验中共构建了NP基因(长1497 bp,表达498个氨基酸的蛋白质)、M1基因(长759 bp,表达252个氨基酸的蛋白质)和M2基因(长322 bp,表达97个氨基酸的蛋白质)三个基因的核酸疫苗,疫苗构建鉴定正确后,通过大量提取质粒制备核酸疫苗。并将实验按下述组别进行免疫:1)用NP核酸疫苗对小鼠进行二次、三次、四次、五次、六次免疫;2)用M1、M2核酸疫苗对小鼠分别进行二次、三次、四次、五次、六次免疫(M2只进行了四次、五次和六次免疫);3)用NP+M1(NP和M1 DNA疫苗混合)核酸疫苗对小鼠分别进行二次、三次、四次、五次、六次免疫。采集每次免疫后小鼠的血清,并在免疫完后一周进行致死量同型流感病毒感染实验,病毒感染后观察小鼠的体重丢失率和存活率,通过小鼠体内抗体滴度,存活率和体重丢失率三个指标来评价疫苗的免疫保护效果。 实验结果表明,血清中抗M1 IgG抗体含量随着免疫次数的增加而增高,免疫六次时抗体含量最高,其它免疫组情况也大致相同,随着免疫次数的增长抗体呈上升趋势;在攻毒后的观察期中,体重丢失率M2＞M1＞NP＞(NP+M1);NP DNA疫苗在六次免疫后能提供50%以上的保护;M1 DNA疫苗在六次免疫后能对小鼠提供约40%保护;M2 DNA疫苗不能为小鼠提供保护;(NP+M1)DNA疫苗免疫的小鼠保护效果最好,只三次免疫就能提供80%以上的保护,它的保护效果要比单独免疫NP和M1好。
[Abstract]:DNA vaccine is a new vaccine developed in recent years from the field of gene therapy. It can induce persistent humoral and cellular immune responses, and has the function of preventing and treating diseases.
The influenza virus nucleoprotein (nucleoprotein, NP) and matrix protein (matrix proteinM) with high specificity, according to NP and M is different, can be divided into influenza virus A, B, C three, and their nucleotide sequences are highly conserved. The influenza virus A A/PR/8/34 (PR8) (H1N1) the influenza virus nucleoprotein gene (NP) and matrix protein (M) gene was cloned into the eukaryotic expression vector, constructed DNA vaccine in mice and NP model to evaluate the protective immunity of M DNA vaccine, hoping to get some results in the prevention of influenza.
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本文编号：1427315
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