云南省异盘并殖吸虫的形态和分子标记研究
本文关键词：云南省异盘并殖吸虫的形态和分子标记研究 出处：《昆明医学院》2010年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】： [目的]在形态学分类的基础上,结合DNA序列分析的方法深入研究异盘并殖吸虫的虫种独立性,及其在并殖科吸虫中的分类学地位,建立基因进化树,确定云南省异盘并殖吸虫与其他地区相同或不同虫种间的亲缘关系,逐步澄清并殖科吸虫的虫种争议,探讨更加客观和易于鉴定的分类学方法,并为进一步研究各虫种的生物学特性、地理分布、对人体的致病性,以及开展相关的防治工作奠定重要基础,为云南省并殖吸虫的研究和并殖吸虫病的防治提供有价值的科学依据。 [方法]从异盘并殖吸虫流行区采集溪蟹,经分类鉴定后分离囊蚴,感染实验动物大白鼠获得成虫和虫卵。观察囊蚴、成虫及虫卵形态,并测量其大小；扫描电镜观察成虫的皮棘形态特征。用试剂盒分别提取囊蚴和成虫的DNA，利用ITS2和CO1引物体外扩增获得ITS2和CO1基因序列,通过GenBank的Blast程序和DNASTAR的MagAlign程序进行基因的同源性分析,使用MAGE 4.0软件构建基因进化树。 [结果]本次共采集到两类溪蟹,分类地位隶属于溪蟹总科,溪蟹科,溪蟹属,分别为景洪溪蟹和毛足溪蟹；景洪溪蟹头胸甲表面较隆,暗红色,分区明显,前侧缘具有细齿10余个；两螯不对称,以右螯为大；雄性第1腹肢粗壮,倒数第2节长度约为末节的3.6倍,末缘似山峰样起伏,尖锐指向外方；雄性尾节三角形,雌性尾节半圆形。毛足溪蟹头胸甲表面扁平,暗褐色,具有短刚毛,前侧缘具有细齿13-15个；两螯稍不对称；第3颚足外肢有短鞭；雄性第1腹肢扁平,倒数第2节长度约为末节的3.0倍；雄性腹部呈三角形,尾节长三角形；雌性腹部卵圆形,尾节半圆形。 异盘并殖吸虫活体成虫肉红色,作蛭样运动。轻压固定后呈椭圆形,虫体宽长比为1：1.56-2.12。口腹吸盘比为1.62-2.09：1,口吸盘明显大于腹吸盘。卵巢多位于腹吸盘左侧，前缘位于腹吸盘水平前后,分支细而多；子宫管状蟠曲成团,与卵巢并列、大于卵巢,其前缘多超过腹吸盘水平,并与腹吸盘部分或完全重叠。睾丸分别位于卵巢和子宫团的下方,中心部较小,分支末端常有显著膨大。异盘并殖吸虫囊蚴多呈椭圆形,具有二层囊壁,外壁薄而均匀,内壁远较外壁厚且两极增厚明显,内外壁之间的间隙明显。异盘并殖吸虫虫卵多呈卵圆形,金黄色,绝大多数两侧对称；卵壳厚薄不均匀,末端增厚明显；卵盖位于较宽一端,肩峰多明显；扫描电镜观察成虫体表被有单生型皮棘,虫体前中部皮棘密集,排列规则；虫体后部皮棘稀疏,排列不规则,形状似尖刀状或三角形；口吸盘内壁为纵向皱襞,腹吸盘内壁为环形皱襞。 通过Blast同源性比较,来自中国云南与印度Arunachal和Manipur地区的异盘并殖吸虫ITS2基因同源性为98%,与泰国Saraburi地区的异盘并殖吸虫ITS2同源性99%,与中国云南的丰宫和印度的卫氏并殖吸虫ITS2同源性分别为95%和93%；来自中国云南与泰国、越南、中国广西地区的异盘并殖吸虫CO1基因同源性为98%,与来自印度的异盘并殖吸虫CO1基因同源性为91%。ITS2和CO1基因进化树显示已报道的所有异盘并殖吸虫聚为一支,与其它虫种间差异明显。 [结论]云南的景洪溪蟹和毛足溪蟹是异盘并殖吸虫的第二中间宿主。家猫对异盘并殖吸虫的易感性明显优于SD大鼠,家猫是异盘并殖吸虫的理想实验动物模型；而大鼠则不理想。云南省存在的异盘并殖吸虫与其它地区报道的异盘并殖吸虫无明显形态学差异。DNA序列分析显示来自不同地区的异盘并殖吸虫同源性极高,进化树上聚类为一支,独立于其它虫种之外。
[Abstract]:On the basis of morphological classification , the author further studies the species independence of the different species and the taxonomic status of the species in the same or different species , and establishes a genetic evolutionary tree to determine the genetic relationships among the species of different species in Yunnan Province , and to establish a more objective and easy - to - identify taxonomic method , and to provide a valuable scientific basis for further study on the biological characteristics , geographical distribution , pathogenicity of the species and the related prevention and control work . In this paper , the morphological characteristics of adult worms and eggs were observed by using the kit . The DNA of the cysts , adults and eggs was observed by scanning electron microscope . The sequences of the ITS2 and CO1 genes were amplified by using ITS2 and CO1 , and the gene sequences were amplified by the BLAST program of GenBank and MagAlign program of DNASTAR . The gene was constructed by using MAGE 4.0 software . There are two kinds of river crabs collected in this time . The classification status belongs to the general family of the river crab , the river crab family and the river crab , which are respectively the JingHongxi crab and the hairy foot flow crab ; the front side edge of the crab head of the river crab is long , dark red , the partition is obvious , the front side edge has more than 10 fine teeth ; the two chelators are slightly asymmetrical ; the length of the second section of the third jaw foot is about 3.0 times of the last section ; the male abdomen is triangular , the tail section is long triangle ; the female abdomen is oval , and the tail section is semicircular . The present invention is characterized by the following : 1 : 1 : 1 : 1 . 56 - 2 . 12 . The ratio of the width to length is 1 : 1 . 56 - 2 . 12 . The ratio of the diameter of the abdomen to the abdomen is 1 : 1 . 56 - 2 . 12 . The homology of ITS2 gene from Yunnan and Arunachal and Manipur areas of China was 98 % . The homology of ITS2 was 95 % and 93 % respectively . Conclusion There is no significant difference in the susceptibility of domestic cats to the different regions , but there is no obvious morphological difference between the two species . The DNA sequence analysis shows that there is a very high homology among the different species in Yunnan Province , and the evolution tree cluster is one , independent of the other species .
【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R383.23
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，本文编号：1440352
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