人脐带间充质干细胞对小鼠造血系统自然衰老的影响

发布时间：2018-01-27 16:54

  本文关键词： 间质干细胞 脐带 衰老 造血干细胞 移植 造血重建　出处：《暨南大学》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的： 从人脐带中分离、培养和纯化人脐带间充质干细胞(hUC-MSC),通过探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)对小鼠造血系统自然衰老的延缓作用,以进一步了解其生物学特性,为开拓其应用提供实验依据。 方法： 1.人脐带间充质干细胞的分离、培养和鉴定 经胶原酶Ⅳ消化和贴壁培养法,从足月新生儿脐带组织中获取hUC-MSC。采用流式细胞仪检测细胞表面标志,诱导hUC-MSC向脂肪细胞、成骨细胞分化,并以油红O染色和碱性磷酸酶染色进行分化鉴定,同时比较人脐带间充质干细胞与成年小鼠骨髓间充质干细胞的生长增殖能力和成骨、成脂分化能力。 2.人脐带间充质干细胞对小鼠造血系统自然衰老的干预实验 由脐带分离的hUC-MSC作为供体,6月龄的Balb／c小鼠作为受体。将小鼠随机分为实验组和对照组。前者输注hUC-MSC(5×105／只),每月1次,共6次；后者输注生理盐水。干预后观察小鼠一般情况,于干预开始后第3个月分别比较两组的外周血象(WBC与Hb)、单侧股骨骨髓有核细胞计数(BMNC)、成纤维细胞集落培养(CEU-F)、造血祖细胞集落培养(CFU-GM、CFU-E、CFU-MK)和外源性脾集落形成单位计数(CFU-S)；于干预后第6个月重复测定两组上述指标,并同时进行骨髓切片观察、骨髓细胞的重建造血能力比较。 3.干预后第6个月,免疫组化检测骨髓切片中细胞衰老分子p16蛋白、骨髓脂肪化关键分子PPARγ蛋白和植入的人hUC-MSC的表面分子人CD44。 结果： 1.人脐带间充质干细胞的分离、培养和鉴定 hUC-MSC强表达CD44、CD29,不表达造血干细胞标志CD14、CD34和CD45,不表达内皮细胞标志CD31,不表达HLA-DR和CD106。向脂肪细胞诱导10d后,油红O染色为阳性；向成骨诱导3w,碱性磷酸酶染色阳性。hUC-MSC的生长增殖能力和成骨分化能力强于成年小鼠骨髓间充质干细胞,而成脂分化能力弱于成年小鼠骨髓间充质干细胞。2.人脐带间充质干细胞对小鼠造血系统自然衰老的干预实验 实验组小鼠的一般存活情况优于对照组。干预后第3个月时,实验组的BMNC、CFU-GM和CFU-MK[(10.0±1.2)×106、35.1±6.5、57.9±12.4]多于对照组[(8.9±1.2)×106、27.5±8.3、49.9±12.1],而外周血象、CFU-F、CFU-E和CFU-S无明显差别；干预后第6个月时,除外周血象仍无差别外,其余的上述指标实验组[(9.4±0.8)×106、51.1±12.8、31.6±8.6、25.6±6.9、52.4±11.6、40.4±5.9]均明显高于对照组[(7.9±0.7)×106、40.0±9.3、21.3±9.6、19.0±6.1、41.1±9.2、34.9±5.9],这些指标在干预前、第3个月、第6个月出现不断下降的趋势,但实验组的下降速度明显慢于对照组,差异有显著性(p0.05)。骨髓切片显示实验组造血组织多于对照组,骨髓细胞的造血重建能力也明显优于对照组。3.免疫组化检测实验组骨髓切片中p16蛋白和PPARγ蛋白表达量明显低于对照组。实验组骨髓组织中人CD44阳性表达,而对照组为阴性。 结论： 1.成功的从人脐带中分离出hUC-MSC,该细胞是一种增殖能力更强的间充质干细胞。 2.hUC-MSC可以抑制小鼠骨髓脂肪化,延缓造血干细胞在衰老过程中集落生成活性下降的速度,具有抗衰老的作用。
[Abstract]:Objective:
Human umbilical cord mesenchymal stem cells (hUC-MSC) were isolated from human umbilical cord and cultured and purified. The delaying effect of human umbilical cord mesenchymal stem cells (hUC-MSC) on natural aging of mice hematopoietic system was explored, so as to further understand its biological characteristics, and provide experimental evidence for developing its application.
Method锛，

本文编号：1468941