EB病毒编码的病毒白介素-10基因多态性研究

发布时间：2018-01-28 08:48

本文关键词： EB病毒 vIL-10 鼻咽癌胃癌基因多态性　出处：《青岛大学》2013年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)开放读码框架BamHI-C片段(BCRFI)与人白介素-10(hIL-10)基因有高度同源性,其编码的病毒IL-10(vIL-10)与hIL-10有相似的生物学活性,主要表现为免疫抑制活性。本研究旨在明确鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)、EBV相关胃癌(EBV-associated gastric carcinoma, EBVaGC)和健康人群中vIL-10的变异规律,探讨其变异意义。方法对164例山东地区EBV阳性标本,包括83例NPC和41例EBVaGC组织以及40例健康成年人咽漱液(Throat washing,TW)标本提取DNA,采用PCR和DNA测序检测vIL-10编码基因BCRFI的序列,应用DNAStar软件对vIL-10基因核苷酸及氨基酸序列进行对比分析。与EBV标准株序列比较,根据vIL-10成熟蛋白和信号肽区域出现的特征性改变对变异进行分类,比较NPC、EBVaGC和健康人群变异型的分布,分析序列变异对蛋白功能的影响。同时与以往发表同一人群EBV基因组BamHIF片段缺乏或出现BamHI识别位点的F/f分型(F和f型EBV)、早期基因BARF1变异(B95-8、V29A和Others变异型)进行连锁分析。结果①应用DNA Star MegAlign分析,NPC、EBVaGC和健康人群TW标本中vIL-10基因序列相似性高达98.8%,126例(76.8%,126/164)标本与标准株B95-8氨基酸序列一致,被分类为B95-8变异型。②vIL-10成熟蛋白序列未发现共有氨基酸突变,出现6处无规律散在突变；vIL-10基因信号肽序列共发现2处共有错义突变(V6M和G23S)和4处散在突变(R4S、L5F、C21R和D25N)。32例(19.5%,32/164)标本在信号肽区域发生氨基酸突变,被分类SPM变异型,另外6例(3.7%,6/164)标本在成熟蛋白序列各出现1处无规律散在突变,分类为其它组(Others)。③vIL-10成熟蛋白序列受体结合区域及免疫抑制功能区域均高度保守,信号肽序列某些变异可能会影响信号序列的切割及蛋白质分泌。④NPC、EBVaGC和健康人群均以B95-8变异型检出率最高,但SPM变异型仅在25例NPC(30.1%,25/83))NPC组织标本和7例(17.5%,7/40)健康人群TW标本中检出,EBVaGC组织中未发现该变异型,vIL-10变异型在NPC和健康人群的分布与EBVaGC明显不同(EBVaGC vs NPC:P0.0001; EBVaGC vs TW:P=0.006), NPC和健康人群之间的分布无显著性差异(P=0.255)。⑤F/f分型、BARF1和vIL-10变异均成功检测的145例标本共发现10种不同的连锁基因型(BamHI F/BARF1/vIL-10),以typeF/B95-8/1395-8最为多见,占67.6%(98/145)。10种连锁基因型在EBVaGC和健康人群之间的分布无显著性差异(P=0.480),但二者与NPC的分布不同,差异有显著性(NPC vs EBVaGC:P0.0001; NPC vs健康人群P=0.007), type f/V29A/SPM、 type F/V29A/B95-8和type F/B95-8/SPM在NPC具有相对较高的检出率。F型和f型EBV毒株中BARF1/vIL-10基因型的分布不同(P0.0001),f型EBV主要对应V29A/SPM,占78.6%(11/14),而F型EBV主要对应B95-8/B95-8,占74.8%(98/131)。结论①vIL-10基因序列高度保守,尤其是其功能区。高度保守的序列利于其发挥免疫抑制功能,从而帮助EBV逃避和抵抗宿主免疫系统的抗病毒作用,长期在宿主体内寄生。②B95-8变异型是山东地区vIL-10主要型别,SPM变异型可能与鼻咽部和口咽部上皮细胞相关。③BamHI F、BARF1和vIL-10基因变异存在关联性,NPC中f型EBV主要对应V29A/SPM基因型,且type f/V29A/SPM连锁基因型在NPC检出率相对较高,提示其与NPC相关。BamHIF、BARF1和vIL-10基因变异与NPC发生的相关性尚需采集NPC高发区NPC和非NPC标本加以证实。
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【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R373.11

【参考文献】