人脐带沃顿胶间充质干细胞的分离培养及其诱导分化

发布时间：2018-02-01 10:50

  本文关键词： 脐带沃顿胶间充质干细胞 分离 培养 脐带沃顿胶间充质干细胞 鉴定 诱导分化　出处：《中南大学》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的：建立一种简便、快捷、经济、高效脐带沃顿胶间充质干细胞的获取方法。 方法：脐带剔除血管和外膜后,余下的胶冻状组织,即沃顿胶(Wharton’s jelly, WJ)剪碎至1-2mm3大小,按一定比例均匀放置于含FasGrow培养基的6孔板中,37℃、5%的CO2培养箱内培养。待细胞游出后,用胰蛋白酶消化传代培养并入液氮冻存。取第5代细胞行HE、Gimesa染色,观察细胞形态。 结果：沃顿胶组织静置培养7天左右,部分细胞从组织块中游出,多为双突起的长梭形、短棒状或扁平形的成纤维样细胞；14天左右,细胞形态变为均一的纺锤形,细胞生长达到单位面积的70%-80%。传代后可维持未分化状态并稳定增殖,细胞倍增时间为3d左右,体外增殖达20代以上；P3代以后,细胞形态较单一。复苏后的细胞能很好生长,细胞形态,生长特点与冻存前基本一致。 结论：种植法简单、快捷、经济、高效,能从脐带沃顿胶中分离出大量成纤维样细胞。 目的：判断从脐带沃顿胶中分离出的成纤维样细胞是否是脐带沃顿胶间充质干细胞,并确定其分化潜能。 方法：取第5代细胞进行免疫组化,检测其免疫表型。用含地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠的FasGrow培养基诱导该成纤维样细胞向成骨细胞分化,并进行碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色及四环素染色鉴定成骨细胞特性；用含地塞米松、维生素C、异丁基甲基黄嘌呤的FasGrow培养基诱导该成纤维样细胞向成脂细胞分化,并进行油红O染色鉴定成脂细胞特性；用含β-巯基乙醇的FasGrow培养基诱导该成纤维样细胞向神经样细胞分化,并通过特异性抗体鉴定其分化能力。 结果：表面标记分析显示：CD44、CD105、CD133、MHC-Ⅰ呈阳性,CD34、CD45呈阴性,从脐带沃顿胶中分离出的成纤维样细胞为间充质干细胞；体外诱导实验表明：该细胞具有体外成脂肪、成骨和成神经样细胞分化的能力。 结论：从脐带沃顿胶中分离出的大量成纤维样细胞表达间充质干细胞的表面标记,并具有多向分化潜能,可作为组织工程中种子细胞的重要来源。
[Abstract]:Objective: to establish a simple, fast, economical and efficient method for obtaining mesenchymal stem cells from Wharton gum of umbilical cord. Methods: after the umbilical cord was removed from blood vessels and adventitia, the remaining gelatinous tissue, Whartonia jelly (WJJ), was shredded to the size of 1-2mm3. The cells were cultured in a CO2 incubator at 37 鈩，

本文编号：1481680