D-半乳糖诱导大鼠骨髓基质细胞衰老

发布时间：2018-02-09 09:33

  本文关键词： 骨髓基质细胞 衰老 氧化应激　出处：《中国组织化学与细胞化学杂志》2015年06期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的建立体外骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSSCs)衰老模型,分析衰老BMSCs生物学特性,为进一步研究衰老BMCs对造血细胞的影响奠定实验基础。方法雄性健康SD大鼠BMSCs全骨髓贴壁法体外培养,实验分为对照组和衰老模型组。对照组为常规培养48h;衰老模型组为常规培养基内加入D-半乳糖。CCK-8法测定BMSCs增殖能力;流式细胞术分析细胞周期;衰老特异性β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察衰老BMSCs百分率;酶学法检测BMSCs内过氧化物丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性,DCFH-DA流式荧光检测BMSCs活性氧簇(ROS)水平;Western Blotting检测BMSCs衰老相关信号蛋白P16、P21、P53的水平;ELISA检测BMSCs培养上清液中IL-1β、GM-CSF、SCF的含量。结果与对照组相比,衰老模型组BMSCs增殖能力显著下降;处于G1期的BMSCs比例增高、S期细胞比例降低,细胞阻滞于G1期;BMSCs SA-β-Gal染色阳性率显著上升;胞内ROS、MDA含量上升,SOD含量下降;P16、P21、P53水平明显上调;BMSCs培养上清液中IL-1β、GM-CSF、SCF含量明显下降。结论 D-半乳糖诱导骨髓基质细胞衰老可能与氧化损伤激活衰老相关信号通路有关,衰老骨髓基质细胞分泌活性造血生长因子减少。
[Abstract]:Objective to establish bone marrow stromal cells in vitro (bone marrow stromal cells, BMSSCs) aging model, analysis of biological characteristics of aging BMSCs, which laid a foundation for further study of aging effect of BMCs on hematopoietic cells. Methods BMSCs male healthy SD rats by whole bone marrow adherent method in vitro culture, the experiment was divided into control group and aging model control group. Group of cultured 48h; aging model group for the determination of the proliferation ability of conventional BMSCs medium with D- galactose.CCK-8 method; cell cycle analysis by flow cytometry; senescence specific beta galactosidase (SA- beta -Gal) staining was observed in senescent BMSCs percentage; enzymatic method in detection of BMSCs malondialdehyde (MDA) content and total superoxide dismutase (SOD) activity, DCFH-DA, flow cytometry and fluorescence detection of BMSCs reactive oxygen species (ROS) level; Western Blotting detection of BMSCs senescence related signal protein P16, P21, P53; ELISA BMSC S in supernatant of IL-1 beta, GM-CSF, SCF respectively. Results compared with the control group, aging model group BMSCs proliferation decreased significantly; at the time of G1 BMSCs ratio increased, the proportion of cells in S phase decreased, cells in G1 phase increased significantly; the positive rate of BMSCs SA- beta -Gal staining; intracellular ROS, MDA content increased, SOD content decreased; P16, P21, P53 level was significantly increased; BMSCs in supernatant of IL-1 beta, GM-CSF, SCF content decreased significantly. Conclusion D- galactose induced aging and oxidative damage of bone marrow stromal cells may activate the aging related signaling pathways related to aging of bone marrow stromal cells secreting hematopoietic growth factor reduced.

【作者单位】： 重庆医科大学干细胞与组织工程研究室;重庆医科大学组织胚胎学教研室;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81173398) 重庆市科委基础与前沿研究项目(cstc2014jcyj A10001)
【分类号】：R329.2

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