抗淋病LTB-PorB核酸疫苗与重组蛋白疫苗联合免疫的免疫增强效应研究
本文关键词： 淋病奈瑟菌 孔蛋白B 大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 核酸疫苗 蛋白疫苗 联合免疫 免疫活性 出处：《南华大学》2010年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】： 目的： 将LTB-PorB核酸疫苗和重组蛋白疫苗鼻饲免疫BALB/c小鼠,分别分析其免疫活性,探讨粘膜佐剂LTB能否辅佐PorB诱导更有效的特异性粘膜免疫,为经粘膜途径感染病原体的疫苗研制进行有益探索；采用LTB-PorB核酸疫苗与重组蛋白疫苗联合(核酸初免-蛋白加强免疫)鼻饲免疫雌性BALB/c小鼠,探讨其能否增强特异性体液免疫和细胞免疫应答水平,为研制高效抗淋病疫苗提供实验依据。 方法： 1.对本课题组保存的真核表达重组质粒pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)/porB和pcDNA3.1(-)/ltB-porB进行鉴定后,大量制备并纯化；鼻饲免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫水平。 2.将本课题组保存的原核表达重组质粒pET-30a/ltB、pET-30a/porB和pET-30a/ltB-porB在大肠杆菌BL21中诱导表达重组蛋白；鼻饲途径免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫水平。 3.大量制备LTB-PorB核酸疫苗及重组蛋白疫苗；通过鼻饲途径将核酸疫苗和重组蛋白疫苗采用核酸初免-蛋白加强(DNA prime-protein boost)联合免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫应答水平。 结果： 1. LTB-PorB核酸疫苗(pcDNA3.1(-)/ltB-porB)免疫组小鼠生殖道黏膜产生的PorB特异性sIgA和血清IgG水平随免疫时间呈上升趋势,第8 w sIgA A450值达0.4705±0.088,明显高于对照组(P0.01),效价达1：320；第8 w IgG A450值为0.528±0.106,明显高于pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)和PBS对照组(P0.01),效价达1：1280,但与pcDNA3.1(-)/porB对照组(A450：0.511±0.094)无显著性差异(P0.05)。pcDNA3.1(-)/ltB-porB组脾淋巴细胞刺激指数和脾淋巴细胞诱生的IFN-γ、IL-4水平均明显高于pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)和PBS对照组(P0.05)。 2. LTB-PorB重组蛋白疫苗免疫组小鼠生殖道黏膜产生的PorB特异性sIgA水平随免疫时间呈上升趋势,第6 w A450值达0.663±0.095,明显高于对照组(P0.01),效价达1：1280；血清中PorB特异性IgG水平在第4 w达最高,A450值为0.598±0.062,明显高于LTB和蛋白溶解液(Solution Buffer)对照组(P0.01),效价达1：5120,但与PorB对照组(A450：0.570±0.060)无显著性差异(P0.05)。LTB-PorB组脾淋巴细胞诱生的IL-4水平和脾淋巴细胞刺激指数明显高于LTB和Solution Buffer对照组(P0.05),但脾淋巴细胞诱生的IFN-γ水平与对照组无显著性差异(P0.05)。 3. LTB-PorB核酸疫苗和重组蛋白疫苗联合免疫组免疫后第8 w,小鼠生殖道sIgA(A450：1.083±0.179,效价达1：2560)、血清IgG(A450：1.023±0.116,效价达1：20480)、脾淋巴细胞诱生的IL-4(357.58±34.44pg/ml)和IFN-γ(261.85±29.92pg/ml)水平均明显高于对照组(P0.01),小鼠脾淋巴细胞刺激指数(SI：2.12±0.29)较对照组显著增高(P0.05)；核酸疫苗组、蛋白疫苗组和联合免疫组血清IgG亚类IgG2a/IgGl比值分别为1.678、0.455和0.693。 结论： 1. LTB-PorB核酸疫苗和重组蛋白疫苗通过鼻饲免疫雌性BALB/c小鼠,能诱生较高水平的特异性细胞免疫和体液免疫,尤其是粘膜免疫,表明粘膜佐剂LTB可有效提高PorB诱导的特异性粘膜免疫应答水平。 2. LTB-PorB核酸疫苗和重组蛋白疫苗联合免疫诱导的特异性细胞免疫和体液免疫应答水平明显优于单独的核酸疫苗或重组蛋白疫苗,联合免疫以诱导Th2倾向性体液免疫应答为主。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R392
【参考文献】
相关期刊论文 前9条
1 石毅;;核酸疫苗的研究进展[J];安徽农业科学;2006年04期
2 吴丹,王庆敏,陈蕊雯,朱维佳,陈祖欢,孙树汉;猪囊尾蚴抗原cC1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合诱导小鼠免疫应答[J];第二军医大学学报;2004年01期
3 Kassler WJ ,骆丹;性传播疾病的流行病学及预防[J];国外医学.皮肤性病学分册;1994年02期
4 赵明丽;邢益平;黄祖瑚;杜合娟;王世霞;卢山;;DNA疫苗预敏蛋白疫苗增强策略对乙型肝炎病毒表面抗原蛋白免疫应答的影响[J];现代生物医学进展;2009年06期
5 戴志兵;胡四海;陈敏;陆春雪;王玉峰;刘清南;张愉快;余敏君;朱翠明;李忠玉;;淋球菌porB和大肠杆菌ltB融合基因的构建、表达及其免疫活性[J];微生物学报;2010年04期
6 戴洋;朱荫昌;王晓婷;唐建霞;鲁飞;徐明;许永良;管晓虹;;日本血吸虫鸡尾酒式DNA疫苗与蛋白疫苗联合应用增强免疫保护作用的研究[J];中国血吸虫病防治杂志;2008年01期
7 张冉,易新元,曾宪芳,张顺科,蔡春,Larry McReynolds;日本血吸虫Rho GTPase DNA疫苗及重组蛋白疫苗免疫保护机制初探[J];中国寄生虫病防治杂志;2004年05期
8 郑磊;阮黎明;程浩;岑建萍;沈建根;林洁;张行;姚云斌;王琦;陈大方;;淋球菌外膜蛋白Porin I多抗的黏附抑制作用研究[J];浙江大学学报(医学版);2007年01期
9 赵凯,张震宇,卢永干,郑兆鑫;抗口蹄疫蛋白疫苗与DNA疫苗混合物的免疫原性研究[J];中国人兽共患病杂志;2001年05期
，本文编号：1501772
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shiyanyixue/1501772.html
