白介素13和溶血磷脂酸对人肝星状细胞合成Ⅰ型和Ⅲ型胶原的影响

发布时间：2018-02-20 01:12

  本文关键词： IL-13 溶血磷脂酸 肝星状细胞 Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原　出处：《南昌大学》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的: 白细胞介素13(Interleukine-13,IL-13)是一种主要由激活的T淋巴细胞(Th2细胞)产生的具有多效能的免疫调节细胞因子。它可以调节炎症、黏液的产生、组织重建和纤维化。IL-13在肝纤维化、肾纤维化、心脏纤维化、肺纤维化等纤维化疾病发病机制中起重要的作用,它通过与IL-13受体α1(IL-13Rα1)结合产生促纤维化作用,因此它是纤维化疾病治疗的重要靶点。 溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid, LPA)是一种细胞膜脂类衍生物,是已知最小、最简单的甘油磷脂分子。LPA由成纤维细胞、血小板、脂肪细胞、癌细胞等分泌,是一种重要的细胞丝裂原素,它的作用多样化。它具有促进血管平滑肌收缩、促进血小板聚集等作用,也可以抑制细胞的增殖和胶原的合成。 本实验主要检测IL-13是否能促进人肝星状细胞胶原的合成,溶血磷脂酸(LPA)是否能下调人肝星状细胞胶原的合成,为临床上肝硬化等纤维化疾病提供治疗的理论基础和实验依据。 方法: 1.台盼蓝染色检测肝人星状细胞LX-2的活性。 2. HE染色观察LX-2细胞的形态。 3.检测LPA刺激LX-2细胞对IL-13Rα1表达的影响。分别以不同浓度、不同时间刺激LX-2细胞,并设空白对照组,RT-PCR检测IL-13Rα1mRNA的表达。 4.检测IL-13刺激LX-2细胞对Ⅰ型胶原(Procollagen typeⅠ,PCOLⅠ)、Ⅲ型胶原(Procollagen typeⅢ, PCOLⅢ)mRNA表达的影响;检测LPA刺激LX-2细胞对Ⅰ型胶原(PCOLⅠ)、Ⅲ型胶原(PCOLⅢ)mRNA表达的影响,用不同浓度LPA在不同时间刺激LX-2细胞,RT-PCR检测PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA的表达;然后分四组:空白组、IL-13组、LPA和IL-13混合组、LPA组,RT-PCR检测PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA的表达。 5.免疫组化检测Ⅰ型胶原蛋白的表达。分四组:空白组、IL-13组、LPA和IL-13混合组以及LPA组。 结果: 1. LX-2细胞活性良好,而且IL-13和LPA对细胞无毒性作用。 2. HE染色观察LX-2细胞为星状,细胞核呈圆形或椭圆形。 3. RT-PCR检测显示,不同浓度LPA在不同时间刺激LX-2细胞,对LX-2细胞表达IL-13Rα1mRNA无影响。 4. RT-PCR检测显示,IL-13刺激LX-2细胞后,PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA表达上调。 5. 0.1μM浓度的LPA刺激LX-2细胞6h、12h、24h时,LX-2细胞PCOL Ⅰ、PCOLⅢmRNA表达与空白对照组相比无明显变化。1μM、10μM LPA刺激24h后,LX-2细胞PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA表达下降。分组实验结果显示:IL-13组PCOLI、PCOLⅢmRNA的表达均高于空白对照组,而LPA组的表达均低于空白对照组。免疫组化检测PCOLⅠ蛋白表达结果与RT-PCR结果一致。 结论: 1. IL-13、LPA刺激LX-2细胞对IL-13Rα1的表达没有影响。 2. IL-13上调LX-2细胞PCOLⅠ、PCOLⅢ的表达。 3. LPA在达到一定的浓度时下调LX-2细胞PCOLⅠ、PCOLⅢ的表达。
[Abstract]:Objective:. Interleukine-13 (IL-13) is a multipotent immunomodulatory cytokine produced mainly by activated T lymphocyte Th2 cells. It regulates inflammation, mucus production, tissue remodeling, and fibrosis. IL-13 plays an important role in liver fibrosis and renal fibrosis. Heart fibrosis, pulmonary fibrosis and other fibrotic diseases play an important role in the pathogenesis of fibrosis. It is an important target for the treatment of fibrosis by combining with the IL-13 receptor 伪 1tl IL-13R 伪 1. Lysophosphatidic acid (LPA) is a kind of cell membrane lipids derivative, is the smallest known, the simplest glycerol phospholipid molecule. LPA is secreted by fibroblasts, platelets, adipocytes, cancer cells and so on, is an important cell mitogen. It can promote vascular smooth muscle contraction, platelet aggregation, and inhibit cell proliferation and collagen synthesis. The aim of this study was to investigate whether IL-13 could promote the synthesis of collagen in human hepatic stellate cells, and whether lysophosphatidic acid (LPA) could down-regulate the synthesis of collagen in human hepatic stellate cells, and provide a theoretical and experimental basis for the treatment of liver cirrhosis and other fibrosis diseases. Methods:. 1. The activity of LX-2 in hepatic human stellate cells was detected by trypan blue staining. 2. The morphology of LX-2 cells was observed by HE staining. 3. The effect of LPA stimulation on the expression of IL-13R 伪 1 in LX-2 cells was detected, and the expression of IL-13R 伪 1 mRNA in LX-2 cells was detected by RT-PCR with different concentration and time. 4. To detect the effect of IL-13 stimulation on the expression of procollagen type 鈪，

本文编号：1518412