兔骨髓间充质干细胞对角膜内皮细胞增殖及p21和PCNA表达的影响

发布时间：2018-02-21 16:49

  本文关键词： 角膜内皮细胞 MSCs 增生 细胞周期 P21 PCNA RT-PCR　出处：《暨南大学》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的：观察兔角膜内皮细胞(CECs)与骨髓间充质干细胞(BMSCs)共培养后角膜内皮细胞增殖力及细胞周期的变化,采用实时荧光定量PCR对共培养后的角膜内皮细胞的p21基因和PCNA基因表达进行检测,探讨其影响机制。 方法：体外培养的兔角膜内皮细胞与骨髓间充质干细胞在Transwell体系共培养后,倒置相差显微镜,HE染色观察内皮细胞生长及形态变化；通过流式细胞术检测角膜内皮细胞细胞周期的变化；通过荧光定量PCR检测共培养后角膜内皮细胞p21和PCNA基因表达情况,与对照组比较,统计学分析后探讨其增殖机制。 结果：实验组(CECs与BMSCs共培养)较对照组(CECs独立培养)兔角膜内皮细胞G1期细胞较对照组比例下降、S期细胞比例增加,平均增加5%,增殖力显著提高。各组共培养后的角膜内皮细胞HE染色观察见实验组细胞数目较对照组明显增多,细胞密度增高,细胞形态规则,核仁及染色质丰富,核浆比例正常。实验组角膜内皮细胞形态基本规则,实时荧光定量PCR检测显示：实验组与对照组的经实时荧光定量PCR检测角膜内皮细胞p21基因和PCNA基因表达存在组间差别,经独立样本分析两样本均数的比较有统计学意义。 结论：(1)体外共培养兔骨髓间充质干细胞与角膜内皮细胞能在一定程度上促进兔角膜内皮细胞的增生,细胞形态、生物学行为无明显异常改变。(2)共培养后对增殖影响的可能机制与p21基因的表达下调和PCNA基因的表达上调有关。
[Abstract]:Aim: to observe the changes of corneal endothelial cell proliferation and cell cycle after co-culture of rabbit corneal endothelial cells (CECs) and bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs). The expression of p21 gene and PCNA gene in co-cultured corneal endothelial cells was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. Methods: cultured rabbit corneal endothelial cells and bone marrow mesenchymal stem cells were co-cultured in Transwell system. Flow cytometry was used to detect the changes of corneal endothelial cell cycle, and the expression of p21 and PCNA genes in co-cultured corneal endothelial cells was detected by fluorescence quantitative PCR. Compared with the control group, the proliferative mechanism of p21 and PCNA was studied statistically. Results: compared with the control group, the ratio of G _ 1 phase cells of rabbit corneal endothelial cells in G _ 1 phase was significantly lower than that of control group. The number of corneal endothelial cells in the experimental group was significantly higher than that in the control group, cell density was increased, cell morphology was regular, nucleolus and chromatin were abundant, and the number of cells in the experimental group was higher than that in the control group. The morphology of corneal endothelial cells in the experimental group was normal and the expression of p21 gene and PCNA gene in the corneal endothelial cells were detected by real-time fluorescence quantitative PCR. The comparison of the mean number of two samples by independent sample analysis has statistical significance. Conclusion in vitro co-culture of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells and corneal endothelial cells can promote the proliferation and morphology of rabbit corneal endothelial cells. The possible mechanism of the effect of co-culture on proliferation was related to the down-regulation of p21 gene expression and the up-regulation of PCNA gene expression.
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R329

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本文编号：1522370