人类调节性γδT细胞的体外诱导、表型鉴定、免疫调节活性及与系统性红斑狼疮的相关性研究

发布时间：2018-02-25 17:38

本文关键词： 调节性γδT细胞 TGF-β CD27 系统性红斑狼疮 Vδ1细胞　出处：《北京协和医学院》2010年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：γδT细胞是不同于αβT细胞的一群T淋巴细胞,其表面表达由γ链和δ链组成的T细胞受体(T cell receptor, TCR),在抗原识别和免疫应答中处于特殊的地位。由于γδTCR的有限多样性及其抗原识别的MHC非限制性,γδT细胞一直被视为固有免疫细胞。γδT细胞处于抗肿瘤和感染的第一线,参与了机体对肿瘤的免疫监视和对病原体侵袭的防御反应。然而,除了抗感染和抗肿瘤的作用外,越来越多的证据表明,γδT细胞可能也存在免疫调节作用。为了全面了解γδT细胞的生物学功能,探索γδT细胞调节亚群的存在形式、作用方式和临床意义,本研究以自身免疫性疾病为研究模型,通过体外诱导的方式对γδT细胞的调节功能进行了研究。自身免疫性疾病是与免疫系统自身免疫耐受和平衡密切相关的一类疾病,根据疾病累及的范围可被分为局部性疾病和全身性疾病,但临床上以全身性疾病为主,多器官多系统均会受累。目前对自身免疫性疾病的治疗缺乏针对性,且毒副作用显著,因此,探寻疾病发生的免疫学相关机制,进而找到针对病因的有效治疗方案,是多数自身免疫性疾病治疗面临的首要问题。系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus, SLE)是临床上常见的一种自身免疫性疾病,以免疫系统自身紊乱和多系统受累为主要表现。首先,本研究以SLE患者与健康志愿者外周血中γδT细胞数量、亚群组成和功能分布的差异等方面为切入点,初步探讨了γδT细胞在SLE患者发病过程中所发挥的作用。与健康志愿者相比,SLE患者外周血中γδT细胞的比例显著下降,其中以Vδ2亚群的减少为主,而V8l和Vδ3两群细胞无明显变化；另外,在γδT细胞按照CD27和CD45RA表达情况进行分类后,产生的四个功能亚群中,表型为CD27+CD45RA的中心性记忆细胞亚群明显减少,提示了该群细胞与SLE的相关性。随后,为了证明人类调节性γδT细胞的存在并研究其功能及作用机制,我们依照CD4调节性T细胞(Regulatory T cells, Tregs)的体外诱导条件,进行了对人外周血γδT细胞的体外诱导。在重组的人白细胞介素-2(Interleukin 2, IL-2)以及转化生长因子-β(Transforming growth factorβ, TGF-β)(?)/或白细胞介索-10(Interleukin 10, IL-10)存在的条件下,以抗TCRyδ抗体刺激对人外周血γδT细胞进行了体外诱导。诱导后的γδT细胞与经典的CD4 Treg相似,可表达Treg标志性转录因子Foxp3,表现出对CD4 T细胞增殖的抑制作用,其中Vδ1细胞是发挥免疫调节活性的主要细胞亚群。为进一步研究该群细胞的表型和作用机制,寻找到理想的调节性γδT细胞的分子标志物,我们以胞内转录因子Foxp3的表达为标准,检测与Foxp3表达相匹配的细胞表面分子。通过对细胞表面多个调节功能相关的分子表达水平的分析,发现Foxp3主要表达于CD27+Vδ1细胞中,且CD27+细胞较CD27-细胞具有更明显的抑制CD4 T细胞增殖的作用。尽管如此,部分CD27+细胞并不表达Foxp3,即CD27表达并不完全等同于Foxp3的表达,因此,我们进一步研究了经典的调节性T细胞的标志分子CD25在Vδ1细胞中与Foxp3两者以及CD25、CD27和Foxp3三者表达的相关性。最终,我们确定调节性γδT细胞具有Vδ1+CD27+CD25+的表型,且其对CD4T细胞增殖的抑制作用主要是通过细胞直接接触的方式实现的。综上所述,本研究初步探讨了γδT细胞在自身免疫性疾病中可能发挥的调节作用,建立并优化了调节性γδT细胞体外诱导的技术策略,并阐明了其调节功能的作用机制,揭示了γδT细胞的新功能,并为自身免疫性疾病中基于γδT细胞的免疫治疗策略提供了理论依据。
[Abstract]:纬未T cells are a group of T lymphocytes which are different from 伪尾T cells , and their surface expresses the T cell receptor ( TCR ) composed of 纬 - chain and 未 - chain . 纬未T cells are regarded as innate immune cells . The autoimmune disease is a kind of disease which is closely related to the immune tolerance and balance of the immune system , and can be divided into local diseases and systemic diseases according to the range of disease progression . Systemic lupus erythematosus ( SLE ) is a common autoimmune disease in clinic . In this study , the number of 纬未T cells in peripheral blood of patients with SLE and healthy volunteers were studied , and the effect of 纬未T cells in the pathogenesis of SLE was preliminarily discussed . In comparison with healthy volunteers , the proportion of 纬未T cells in peripheral blood of patients with SLE was decreased significantly , while V8l and V未3 cells were not changed significantly . In order to prove the existence of human regulatory 纬未T cells and to study its function and mechanism , we have carried out in vitro induction of 纬未T cells in human peripheral blood by anti - TCRy 未 antibody stimulation in the presence of recombinant human interleukin - 2 ( IL - 2 ) and transforming growth factor - 尾 ( TGF - 尾 ) ( ? ) / or interleukin - 10 ( IL - 10 ) . In conclusion , the regulation of 纬未T cells in autoimmune diseases is preliminarily discussed , and the mechanism of regulating 纬未T cell in vitro is established , and the new function of 纬未T cells is revealed , and the theoretical basis is provided for the immune therapy strategy based on 纬未T cells in autoimmune diseases .

【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R392

【共引文献】