人细小病毒B19病毒样颗粒的制备

发布时间：2018-03-01 08:26

  本文关键词： 细小病毒B VP 杆状病毒表达系统 病毒样颗粒 人细小病毒 昆虫细胞 感受态细胞 透射电镜 病毒感染 制备　出处：《生物工程学报》2009年04期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：采用昆虫杆状病毒表达系统,制备人细小病毒B19病毒样颗粒(VLPs)。先通过PCR方法合成细小病毒B19衣壳蛋白基因VP2,将其克隆到pFastBac1质粒,然后转化含杆状病毒穿梭载体Bacmid的E.coliDH10Bac感受态细胞,获得重组杆状病毒表达质粒Bacmid-VP2。在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,包装重组杆状病毒rBac-VP2。利用rBac-VP2感染Sf9细胞表达B19VP2蛋白,通过间接免疫荧光、Western blotting等方法鉴定目的蛋白表达。采用两次超速离心的方法对表达产物进行纯化,纯化产物在透射电镜下可见直径约22nm的VLPs。本研究成功制备了人细小病毒B19的VLPs,为B19感染血清学检测方法的建立提供了参考。
[Abstract]:Human parvovirus B19 virus like particles were prepared by using insect baculovirus expression system. The parvovirus B19 capsid protein gene VP2was synthesized by PCR method and cloned into pFastBac1 plasmid. Then the E. coli DH10Bac cells containing baculovirus shuttle vector Bacmid were transformed to obtain the recombinant baculovirus expression plasmid Bacmid-VP2. the recombinant baculovirus expression plasmid Bacmid-VP2was transfected into Sf9 insect cells mediated by liposome, and the recombinant baculovirus rBac-VP22.The recombinant baculovirus was infected with Sf9 cells and expressed B19VP2 protein by rBac-VP2. The expression of the target protein was identified by indirect immunofluorescence and Western blotting, and the expression product was purified by two ultracentrifugation. In this study, VLPsof human parvovirus B19 were successfully prepared, which provided a reference for the establishment of a serological detection method for human parvovirus B19 infection.
【作者单位】： 山东大学医学院微生物学教研室;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;
【基金】：国家科技支撑计划(No.2008BAI56B01)资助~~
【分类号】：R373

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本文编号：1551153