炭疽杆菌A16R免疫蛋白质组学的研究

发布时间：2018-03-01 21:05

  本文关键词： 炭疽芽孢杆菌 芽孢蛋白 营养体蛋白 抗原 免疫蛋白质组学　出处：《华中农业大学》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 炭疽是由炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis, BA)引起的一种烈性人畜共患传染病。由于炭疽芽孢易于大量培养、极难被杀灭、可通过气溶胶途径传播,并且引起的吸入性肺炭疽死亡率较高等特点,所以长期以来一直被某些国家认为是首选的生物战剂。自美国“911”事件发生后,BA研究再次成为世界各国关注的热点。而预防炭疽最有效的方法是疫苗,所以炭疽疫苗的研究成为目前研究的热点,而从BA中筛选具有免疫原性的蛋白质则是疫苗设计的关键。本研究采用蛋白质组学研究方法,大规模筛选BA营养体和芽孢蛋白中可能存在的免疫原性蛋白质,这将为我们深化炭疽芽孢杆菌的认识,以及检测、诊断炭疽芽孢杆菌与对炭疽的早期治疗提供靶标。主要研究结果如下： 以BA A16R菌株为实验菌株,采用固态培养,在含有200 mL的LB固态培养基的罗氏瓶内进行培养,先放于37℃的培养箱内正置一天后,再倒置于30℃培养箱内培养10-15 d,用4℃灭菌纯水清洗培养基表面,8000r／min离心10 min收集芽孢,直至复红美兰染色观察芽孢纯度达到98%为止。然后将收集的芽孢用2 mL的4℃灭菌纯水重悬,稀释涂板计数,得到芽孢浓度为5.5×109CFU／mL。 以收集纯化的芽孢免疫4只新西兰大白兔,首次家兔腹股沟免疫,间隔14d后耳静脉免疫2次,后来采用皮下多点免疫,且免疫相隔7d,共免疫5次,以间接ELISA测定血清效价达到12800。免疫印迹实验验证了,所制备的血清可以与炭疽蛋白发生反应,所以制备出的血清为下一步筛选具有免疫原性的蛋白点提供了材料。 采用超声裂解方法分别制备BAA16R菌株的营养体和芽孢蛋白样品,蛋白样品经双向电泳分离,电转膜后,用上述制备的多克隆抗体进行免疫印迹。然后将双向电泳的考马斯亮蓝染色胶图与免疫印迹曝光图匹配比对,找出匹配的蛋白点后,进行胶内酶切和质谱鉴定。结果表明,BA的营养体蛋白样品中有86个具有免疫原性的蛋白点,BA的芽孢蛋白样品中有13个具有免疫原性的蛋白点。在这些免疫原性的蛋白点中,19种蛋白质在以前的文献中被报导外,其他的蛋白质均未见报道。本研究结果为BA新疫苗的研发提供了新线索。
[Abstract]:Anthrax is a potent zoonotic infectious disease caused by Bacillus anthracis (BA). And the mortality rate of inhaled lung anthrax is relatively high. So it has long been regarded by some countries as the preferred biological warfare agent. Since the 9 / 11 incident in the United States, the research of BA has once again become a hot spot in the world. The most effective way to prevent anthrax is vaccine. Therefore, the research of anthrax vaccine has become a hot topic, and the screening of immunogenicity proteins from BA is the key of vaccine design. Screening for possible immunogenic proteins in BA nutrients and spore proteins on a large scale will deepen our understanding and detection of Bacillus anthracis. Diagnosis of Bacillus anthracis and early treatment of anthrax. The main findings are as follows:. BA A16R strain was used as the experimental strain. The culture was carried out in a Roche flask containing 200 mL LB solid culture medium and was placed in a culture box at 37 鈩，

本文编号：1553563