PTD-SARA融合蛋白的表达、纯化及鉴定

发布时间：2018-03-04 00:25

  本文选题：PTD-SARA融合蛋白　切入点：表达　出处：《中国生物制品学杂志》2009年03期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的在大肠杆菌中表达PTD-SARA融合蛋白,并对其进行纯化和鉴定。方法使用大肠杆菌偏爱密码子合成PTD-SARA全长基因,将其克隆入载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-PTD-SARA,转化感受态大肠杆菌M15,IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定及N-端测序。结果重组表达质粒pQE-30-PTD-SARA经双酶切及测序鉴定证明构建正确。1.0mmol/LIPTG诱导4h,目的蛋白的表达量最高,约占菌体总蛋白的25%,主要以包涵体形式存在。纯化的融合蛋白纯度为94%,浓度为0.2mg/ml,且具有良好的反应原性,N-端有14个氨基酸。结论已成功表达并纯化了PTD-SARA融合蛋白,为其功能的研究奠定了基础,也为临床防治肾脏纤维化提供了一个新的策略。
[Abstract]:Objective to express and identify the PTD-SARA fusion protein in Escherichia coli. Methods the full-length PTD-SARA gene was synthesized by using the preferred codon of Escherichia coli and cloned into the vector pQE-30. The recombinant expression plasmid pQE-30-PTD-SARAwas constructed, and the expression was induced by M15TG-induced expression. The expression product was purified by Ni2 -NTA affinity chromatography. Results the recombinant expression plasmid pQE-30-PTD-SARA was identified by double enzyme digestion and sequencing. It was proved that the recombinant plasmid was constructed correctly. 1.0 mmol / L IPTG was induced for 4 h, and the expression of the target protein was the highest. The purity of purified fusion protein is 94 mg / ml, the concentration is 0.2 mg / ml, and there are 14 amino acids in the N- terminal of the N- terminal protein. Conclusion the PTD-SARA fusion protein has been successfully expressed and purified. It lays a foundation for the study of its function and provides a new strategy for clinical prevention and treatment of renal fibrosis.
【作者单位】： 第四军医大学西京医院老年病科;第四军医大学生物技术中心;
【分类号】：Q786

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