Jagged-1在树突状细胞介导T细胞诱导免疫耐受中的作用

发布时间：2018-03-04 09:29

  本文选题：Jagged-1　切入点：树突状细胞　出处：《暨南大学》2008年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的:探讨Jagged-1在树突状细胞(dendritic cells,DCs)介导T细胞诱导同种异基因皮肤移植免疫耐受中的作用及其机制。方法:建立体外诱导小鼠骨髓来源DCs的模型,显微镜下观察Jagged-1对重组粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和白细胞介素4(rmIL-4)协同诱导的小鼠骨髓DCs形态学变化的影响;荧光标记单克隆抗体染色技术结合流式细胞仪检测Jagged-1对不同时间小鼠骨髓DCs分化标记CD11c及DCs成熟标记MHC-Ⅱ、CD86、CD80和CD40表达的影响;利用MTT法检测Jagged-1诱导的DCs、T细胞和DC-T细胞共培养体系中T细胞对同种异基因淋巴细胞增殖的影响;通过Luminex蛋白液相芯片技术和ELISA检测经Jagged-1处理的DCs、T细胞和DC-T细胞共培养体系上清中白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素12(IL-12)、干扰素γ(IFN-γ)、转化生长因子β(TGF-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平;建立同种异基因小鼠皮肤移植模型,磁珠分选Jagged-1介导DC-T细胞共培养体系中CD4~+T细胞,输入受体小鼠,观察皮肤移植物存活时间和移植物病理变化,检测受体外周血中CD4~+CD25~+Treg的表达水平,小鼠混合淋巴细胞反应和迟发型超敏反应。结果:Jagged-1诱导的细胞具有典型成熟DCs的形态特征,培养第6d和12d时,Jagged-1组CD11c细胞平均荧光强度(MFI)均明显增高(P＜0.01与P＜0.05);Jagged-1组CD80、CD40和MHC-Ⅱ~(high)表达细胞的阳性率明显高于对照组(P＜0.05),且CD80和CD40的MFI也明显增高(P＜0.01与P＜0.05),而CD86的MFI无明显变化(P＞0.05);Jagged-1诱导的DCs、T细胞和DC-T细胞均不同程度抑制IFN-γ、IL-2、IL-12和TNF-α等Th1型细胞因子的表达,显著升高TGF-β、IL-6、IL-4或IL-10等Treg或Th2型细胞因子水平;在混合淋巴细胞反应(MLR)中,Jagged-1组DCs、T细胞和DC-T细胞共培养体系中T细胞刺激同种异基因淋巴细胞增殖反应性均显著降低(P＜0.01),DAPT能在一定程度上逆转Jagged-1的作用;Jagged-1介导的DCs直接接触作用后的CD4~+T细胞能延长同种异基因小鼠移植皮片存活时间,皮肤移植物平均存活38.6d,显著高于对照组和DAPT+Jagged-1组(P＜0.01),Jagged-1处理组移植皮片内浸润的炎症细胞数量明显减少;在MLR中,Jagged-1处理组小鼠淋巴细胞对供体小鼠淋巴细胞呈现低反应性(P＜0.01),且加入IL-2逆转效果不明显,而对第三方无关供体KM小鼠淋巴细胞表现强烈的增殖反应;Jagged-1处理组小鼠在迟发型超敏反应中也表现出显著的低反应性(P＜0.01);Jagged-1组小鼠外周血CD4~+CD25~+Treg与对照组(P＜0.01)和DAPT+Jagged-1组(P＜0.05)有显著差异,DAPT能阻断Jagged-1上调CD4~+CD25~+Treg的作用。结论:Jagged-1能诱导骨髓来源DCs的分化和成熟;Jagged-1可以通过抑制IFN-γ、IL-12和TNF-α等Th1型细胞因子表达,促进IL-4、IL-10等的表达诱导外周T细胞向Th2细胞分化,同时诱导DCs促进T细胞向Th2型分化,并减弱DCs刺激淋巴细胞增殖能力;Jagged-1联合DCs处理的CD4~+T细胞诱导小鼠获得供体抗原特异性的免疫耐受,与CD4~+CD25~+Treg数量相对升高,改变Th1/Th2细胞因子平衡极化有关,这些发现可能为临床移植耐受的诱导提供新的治疗靶点。
[Abstract]:Objective: To investigate the effects of Jagged-1 on dendritic cells (dendritic cells DCs) mediated induction effect and mechanism of skin allograft immune tolerance in T cells. Methods: to establish the induced mouse bone marrow-derived DCs in vitro model, under the microscope of Jagged-1 cells of recombinant granulocyte macrophage colony stimulating factor (rmGM-CSF) and interleukin 4 (rmIL-4) changes in bone marrow of mice DCs induced morphological synergy; fluorescence labeled monoclonal antibody staining combined with flow cytometry Jagged-1 on different time of mouse bone marrow DCs differentiation marker CD11c and DCs marker of mature MHC- II, CD86, expression of CD80 and CD40; using MTT method to detect Jagged-1 induced DCs effect of T cells on allogeneic lymphocyte proliferation of co cultured T cells and DC-T cells; Luminex protein by liquid chip technology and ELISA detection of Jagged-1 treated D Cs, T and DC-T cell co culture system in supernatants of interleukin 2 (IL-2), interleukin 4 (IL-4), interleukin 6 (IL-6), interleukin 10 (IL-10), interleukin 12 (IL-12) and interferon gamma (IFN- gamma). Transforming growth factor beta (TGF- beta), tumor necrosis factor alpha (TNF- alpha) expression level; to establish a murine model for allogeneic skin transplantation, multisort Jagged-1 mediated DC-T cell CD4~+T cell co culture system, the input of recipient mice, observe the skin graft survival and graft pathological changes, the expression level of CD4~+CD25~+Treg in peripheral blood testing, mixed lymphocyte reaction and delayed hypersensitivity reaction in mice. Results: Jagged-1 induced cells with typical morphological features of mature DCs, cultured 6D and 12D, the average fluorescence intensity of Jagged-1 group CD11c cells (MFI) were significantly increased (P < 0.01 and P < 0.05); Jagged-1 group CD80, CD40 And MHC- II ~ (high) positive expression rate of cells was significantly higher than the control group (P < 0.05), and CD80 and CD40 MFI were significantly higher (P < 0.01 and P < 0.05), while CD86 MFI did not change significantly (P > 0.05); Jagged-1 induced DCs, T cells and DC-T cells have different degrees of inhibition of IFN- gamma, IL-2, expression of IL-12 and TNF- alpha and Th1 type cytokines, increased TGF- beta, IL-6, IL-4 or IL-10 Treg or Th2 type cytokines; mixed lymphocyte reaction (MLR) in group Jagged-1, DCs, T and DC-T cells were co cultured with T were significantly decreased cells to stimulate allogeneic lymphocyte proliferation reaction system (P < 0.01), DAPT reversed the effect of Jagged-1 to a certain extent; Jagged-1 DCs mediated by direct contact between CD4~+T cells after allogeneic mice can prolong graft survival time of skin graft survival average 38.6d was significantly higher than that of control group and DAP Group T+Jagged-1 (P < 0.01), Jagged-1 group of skin grafts in infiltrating inflammatory cells decreased significantly; in MLR, Jagged-1 treated mice lymphocytes appeared hyporesponsiveness to donor lymphocytes in mice (P < 0.01), and the addition of IL-2 reversed the effect is not obvious, while the third party unrelated donor lymphocyte KM mice a strong proliferative response; Jagged-1 treated mice in the delayed hypersensitivity reaction also showed low reactivity significantly (P < 0.01); peripheral blood CD4~+CD25~+Treg of mice in Jagged-1 group and control group (P < 0.01) and DAPT+ Jagged-1 group (P < 0.05) there is a significant difference, DAPT can block the upregulation of CD4~+CD25~+Treg Jagged-1 effect. Conclusion: Jagged-1 can induce the differentiation and maturation of bone marrow derived DCs; Jagged-1 can inhibit the expression of IL-12, IFN- gamma, TNF- alpha and Th1 type cytokines promoting IL-4, and the expression of IL-10 induced by peripheral T cells to Th2 At the same time, cell differentiation, induction of DCs T cells to promote Th2 differentiation, and attenuate DCs stimulated lymphocyte proliferation; combined treatment of DCs Jagged-1 CD4~+T cells induced by donor antigen specific immune tolerance in mice, increased the relative quantity of CD4~+CD25~+Treg and Th1/Th2 Cytokines Balance polarization is concerned, these findings may provide new therapeutic targets for induction of clinical transplantation tolerance.

【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R392

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本文编号：1565112