弓形虫复合基因疫苗SAG1-ROP2-GRA2的免疫保护性研究

发布时间：2018-03-09 00:01

本文选题：弓形虫　切入点：SAG1　出处：《山东大学》2008年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内寄生的原虫,可感染人类及各种脊椎动物,引起人兽共患弓形虫病。弓形虫呈世界性分布,人群普遍易感,多呈隐性感染,但在免疫抑制或免疫缺陷患者中(如器官移植、恶性肿瘤、AIDS、长期使用免疫抑制剂等)可引起严重的器官损害(多见于脑和眼),作为一种机会性致病因子是导致患者死亡的病原之一。妇女孕期首次感染弓形虫可引起流产,死胎或畸型。此外,由弓形虫引起的禽畜类疾病给畜牧业造成了严重的经济损失。迄今尚无治疗弓形虫病的特效药物,因此研制安全有效的疫苗对人类健康及畜牧业发展意义重大。对弓形虫疫苗的研究经历了死疫苗、减毒活疫苗、基因工程疫苗以及DNA疫苗,DNA疫苗又包括单基因疫苗和复合基因疫苗。由于弓形虫生活史较复杂,抗原成分多,每种抗原在体内诱导的免疫效应有所不同,动物和人体实验均表明,单价亚单位疫苗的免疫效果不太理想。因此,发展多种抗原组合、针对不同生活史发育阶段的复合多价疫苗是研究弓形虫疫苗过程中的一个发展方向与共识,这有助于克服单一抗原成分作为候选疫苗的不足。 SAG1抗原作为弓形虫速殖子表面的主要抗原之一,是迄今应用最多的弓形虫疫苗候选抗原。SAG1蛋白分布于弓形虫速殖子表膜、速殖子内以及纳虫泡的管状结构中,约占弓形虫体总蛋白的3-5%,却可抑制患者血清中抗体活性的50%,说明SAG1含量虽微,却是速殖子的主要抗原成份,是诱导宿主免疫应答的主要靶抗原。能够诱导机体产生IgG,IgM,IgE,IgA及sIgA,抗SAG1抗体在体外有杀虫,在体内有保护作用,并可诱导产生一些细胞因子,如γ-干扰素和细胞毒性淋巴因子,其抗原特异性的CD8+T细胞能直接杀伤细胞外弓形虫,对弓形虫感染的腹腔巨噬细胞亦具有细胞毒性。 ROP2(rhoptry protein)存在于弓形虫速殖子、缓殖子及包囊期,分子量为54kDa,是棒状体分泌的一种蛋白,它可诱导机体产生以IgA,IgM,IgG为主的体液免疫。此外,ROP2可以被人特异性T细胞克隆识别而产生高水平的IFN-γ,后者在控制弓形虫急性及慢性感染中可发挥重要作用。 GRA2是弓形虫纳虫泡内的致密颗粒细胞器分泌的一种致密颗粒蛋白(GRA),分子量为28.5kDa,在编码区有一个内含子,内部存在螺旋结构,为两个不同性质的a-螺旋,GRA2的抗原性很强,用纯化的GRA2免疫小鼠,抗攻击感染的小鼠存活率为75%。目前研究表明GRA2在急慢性弓形虫感染血清中普遍存在,至少存在3个B细胞表位和一个T细胞表位,可诱发机体产生IgG,IgM,IgA多种抗体,激活GRA2特异性的CD4+T细胞,诱导机体的保护性免疫。因此,GRA2作为弓形虫病的诊断抗原及可能的疫苗成分颇具有研究价值。 IL-12可强烈刺激NK细胞和T细胞分泌IFN-γ,继之激活巨噬细胞提高其杀伤弓形虫活力,也能促进CD4+T细胞向Th1细胞分化,并增强NK细胞和CD8+T细胞杀伤功能。同时,IL-12对促进IFN-γ的持续产生也起到重要作用。在弓形虫感染的急慢性其均起到重要作用。弓形虫虫株不同其毒力也不同,感染弱毒株(typeⅡ)可刺激DC、中性粒细胞、巨噬细胞产生高水平的IL-12,能早期诱导IL-12的高表达对控制弓形虫感染起到重要作用。相比之下感染强毒株(typrⅠ)所产生的IL-12的水平非常低。该研究成功地把SAG1、ROP2、GRA2三个基因构建在同一个表达载体pcDNA3.1上,以mIL-12作为基因佐剂,通过肌肉注射的方式免疫小鼠,观察其免疫效果及佐剂增强作用。结果表明该复合基因疫苗的免疫效果明显优于其对照组的免疫效果,且IL-12对该复合基因疫苗起到很好的免疫增强作用。在弓形虫研究领域,国内外尚无此项研究报道。
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【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R392

【引证文献】